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《M1和M2型巨噬细胞表型的比较分析.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、5现代免疫学62008年第28卷第3期#177#M1和M2型巨噬细胞表型的比较分析#李康,郭强,王翠妮,陈敏,徐薇,熊思东(复旦大学免疫生物学研究所,复旦大学上海医学院免疫学系上海200032)摘要:通过对M1和M2型巨噬细胞表型相关指标的比较分析,评价各鉴定巨噬细胞类型的表型指标及其意义。按常规方法以IFN-C及LPS将骨髓来源巨噬细胞诱导成M1型巨噬细胞,以IL-4诱导出M2型巨噬细胞。分别以RT-PCR和酶活性定量方法检测精氨酸代谢相关酶的表达和活性;以ELISA检测IL-12和IL-10的分泌;
2、以FACS检测巨噬细胞膜分子的表达。结果显示:M1型巨噬细胞诱导性一氧化氮合酶(induciblenitricoxidesynthase,iNOS)表达和活性水平较未刺激组明显升高,IL-12产生显著增加,CD16/32表达上调;而M2型巨噬细胞I型精氨酸酶(arginase1,Arg-1)的表达水平和酶活性较未刺激巨噬细胞显著提高,IL-10分泌轻度增加,并且表达高水平的CD206和DECTIN-1。表型比较分析结果表明,iN-OS表达和活性、IL-12的分泌和膜蛋白CD16/32可用于鉴定M1型巨噬
3、细胞,而Arg-1、CD206和DECTIN-1是鉴定M2型巨噬细胞较为理想的表型指标。关键词:M1型巨噬细胞;M2型巨噬细胞;表型分析中图分类号:R392.12文献标识码:A文章编号:1001-2478(2008)03-0177-07巨噬细胞作为一种具有可塑性和多能性的细胞指标及其意义,我们参照公认的经典的方法在体外群体,在体内外不同的微环境影响下,表现出明显诱导了M1型和M2型巨噬细胞,对M1和M2表[1,2]的功能差异。目前根据活化状态和发挥功能的型相关指标进行检测,进而相对量化地比较各表型不同,
4、巨噬细胞主要可分为M1型即经典活化的巨指标,以期为体内外鉴定巨噬细胞类型时表型指标噬细胞(classicallyactivatedmacrophage),和M2的选择提供实验依据。型即替代性活化的巨噬细胞(alternativelyactivated[3,4]1材料与方法macrophage)。在体外培养条件下,通过IFN-C及脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导产生M11.1材料型巨噬细胞和通过Th2型细胞因子(如IL-4、IL-1.1.1实验动物C57BL/6小鼠(H-2b、
5、4~6周13等)诱导产生M2型巨噬细胞,具有与体内极化龄,雌性),体重16~20g,购自上海斯莱克实验的巨噬细胞相似的表型和功能,已成为研究巨噬细动物有限公司。清洁级饲养于复旦大学实验动物科胞异质性的重要手段。学部。在机体不同生理和疾病状态下,巨噬细胞表现1.1.2主要试剂细胞培养基RPMI1640(Gibco出不同的类型,通过表型分析鉴定巨噬细胞类型已BRL公司),小牛血清(GibcoBRL公司),L-谷氨成为研究巨噬细胞功能多样性的主要方法。已有文酰胺(L-Glutamine)(政翔化学试剂研究所)
6、,双抗[5,6][7,8]献主要从精氨酸代谢途径、细胞因子分泌(氨卞青霉素钠、硫酸链霉素)(上海第四制药厂),[9,10]和表面分子的表达等方面区分M1型与M2型胰酶(华美生物工程公司);小鼠重组IFN-C(Pep-巨噬细胞。然而,到目前为止,关于M1和M2型rotech公司),LPS(Sigma公司),小鼠重组IL-4巨噬细胞的表型特征尚未统一。为了评价各种表型(Peprotech公司);TaqDNA多聚酶、dNTP等PCR试剂(Biostar公司),TRIzol(北京鼎国生物公收稿日期:2008-0
7、2-15司),DEPC(Genetimes公司),M-MuLVReverse基金项目:新缰医科Transcriptase(MBI公司);A-异亚硝基苯丙酮(A-作者简介:李康(1983-),男,硕士,主要从事巨噬细胞免疫调节方面的研究。isonitrosopropiophenone)(Sigma公司),Arginine通讯作者:熊思东(E-mail:sdxiongfd@126.com);#共同通讯作者(鼎国生物技术有限责任公司),NO检测试剂盒(Cayman公司);小鼠IL-10ELISA检测试剂盒#1
8、78#5现代免疫学62008年第28卷第3期(eBioscience公司),小鼠IL-12ELISA检测试剂鼠抗小鼠MGL抗体由荷兰Erasmus医学中心P-i盒(eBioscience公司);FITC标记的大鼠抗小鼠eterLeenen教授惠赠,未标记大鼠抗小鼠DEC-F4/80抗体(CALTAGLaboratories公司),PE标TIN-1抗体由南非CapeTown大学GordonBrown记的驴抗大鼠IgG(H+L)抗体(eBios
