m2型巨噬细胞在小肠放射损伤修复中的作用和机制研究

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1、動人#SOOCHOWUNIVERSITY硕士学位论文作用和机制研究研究生姓名齐丹丹指导教师姓名陈秋专业名称放射医学研究方向放射生物学论文提交日期2015年4月苏州大学学位论文独创性声明本人郑重声日I:臟交鮮韻文縣人4领_导下,独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引腦内容外,本论文不含其他个人鷓紀经鎌■写过_究縣，W含为获得苏州大学或其它__鮮倾扼側薦撕。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人雜本声明的法律责任。苏州大学学位论文賴授权声明本人完全了解苏州大学关于收集、保存和賴学位论文

2、的规定，即：学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相-lu苏州大学有权向醜图书馆、中賺科院文献信息情报中心、中国科学技术信息研究所（含万方数据电子出版社)、中国学术姻（光鍊）电子杂志概交本学位论文随_和电子文档，允许论文随_翻，可贼膨印、_或其健制手段保存和汇编学位駐，可以鮮誠文触M部触機入有通_进行检索。涉密论文口本学位论錢在年_藤密后适用本规定。非涉密论文口论文作者签名：日期:—'务.,7导师签名：餐日期：加”7M2型巨噬细胞在小肠放射损伤修复中的作用和机制研究中文摘要M2型巨噬细胞在

3、小肠放射损伤修复中的作用和机制研究中文摘要放射治疗是当今肿瘤治疗的三大手段之一，在病人术前或是术后放疗可以有效治愈肿瘤，减少肿瘤复发概率。但是腹部和盆腔肿瘤在放射治疗过程中，放射性肠损伤是一重要的临床问题。放射性肠损伤是由于肠上皮放射敏感性较高，受照小肠或是结直肠损伤诱发的肠道反应，常常会出现恶心、呕吐、腹痛、腹泻和营养吸收障碍，体重下降，甚至出现便血、肠梗阻、肠篓等病变，严重影响病人的生活质量，不利于放疗对腹盆腔肿瘤的控制。哺乳类动物肠上皮是由单层柱状上皮组成，主要分为两个不同部分：分化区和增生区，分化的上皮细胞主要

4、存在于绒毛和上皮表面，增生上皮细胞主要位于隐窝，可以进一步的分为干细胞和TA细胞，TA细胞具有快速分化并转移到增生区，干细胞又能及时补充TA细胞，因此在增生区连续不断地分化会导致上皮细胞沿隐窝-绒毛轴方向移动，逐渐移动到分化区，并使上皮细胞分化为吸收细胞系（肠细胞）和分泌细胞系（杯状细胞和内分泌细胞）。所以认为肠上皮是由四种肠道上皮细胞系组成，它们1-2都起源于干细胞，并且位于隐窝基底部的干细胞在维持肠上皮平衡起到重要作用。像是肠道感染、放射损伤和特发性肠炎等各种各样疾病引起的肠上皮损伤就会造成上3皮细胞的凋亡、上皮屏

5、障的破坏。上皮层受到损伤，就会逐步激活再生程序，隐窝4干细胞增殖，并移动到分化区，使上皮层恢复连续紧密的结构。那么分化区凋亡的上皮距离隐窝干细胞甚远，如何及时通知到干细胞呢？巨噬细胞是固有免疫系统的组5成部分，在体内最大的巨噬细胞群之一就是肠道巨噬细胞，它们位于上皮屏障下方，参与肠道的免疫应答，但目前原代培养存在困难。Tanja等认为巨噬细胞这种免疫应答激活不仅仅是由于外来物质的刺激，还有上皮参与，所以他们进行了巨噬细胞与上皮细胞的共培养，但是在共培养的第7天发现只有少量巨噬细胞存活;Hiroki等人研究巨噬细胞与上皮

6、细胞之间相互传递信号的机制，试通过体外培养Caco-2与THP-1，并没有首选体内肠巨噬细胞。I中文摘要M2型巨噬细胞在小肠放射损伤修复中的作用和机制研究成熟的巨噬细胞在主要是来源于骨髓，随着外周血液循环到达组织，组织的微环境可使巨噬细胞发生极化。目前巨噬细胞极化类型主要分为两种：M1型主要是参与免疫应答，吞噬有害微生物等，产生炎症因子IL-6、NO等，提高机体的防御，抵御有害物质侵袭；M2型主要是在损伤组织中通过分泌抗炎因子参与修复与重塑，减轻机体炎症反应。鉴于此，本论文首先对肠道自身的巨噬细胞进行了极型鉴定，在体外

7、模拟凋亡肠道上皮细胞诱导Raw264.7细胞极化，探索这种巨噬细胞对隐窝肠道干细胞的作用和机制，为放射损伤的小肠修复提供理论依据。一、小鼠小肠内巨噬细胞极型和在放射损伤中的作用目的：肠道巨噬细胞在放射损伤中的作用方法：通过对对照组和2Gy、8Gy照射组照后72小时和96小时C57BL/6小鼠肠细胞的分离及利用流式细胞分选技术，得到小鼠肠道巨噬细胞；对小鼠肠道巨噬细胞抽提RNA，以IL-10和iNOS基因作为分型标志物，进行实时荧光定量PCR检测，以确定照射前后巨噬细胞极型；正常C57BL/6小鼠在第1天、5天、7天和9

8、天分别经腹腔注射200μlClodronate脂质体、PBS脂质体部分祛除小鼠肠道巨噬细胞，第8+天和第11天进行流式细胞术分析小鼠胸腺、淋巴、肠道、脾脏、骨髓CD68细胞选取最佳祛除巨噬细胞的时间点；对照组与照射组小鼠均分别给予Clodronate脂质体和PBS脂质体，第8天小鼠进行8Gy的全身照射并在照后72小时、96小时采肠