叶绿素的提取及稳定性实验.doc

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1、叶绿素的提取及稳定性实验一、实验目的　　1.掌握测定叶绿素含量的原理和方法。　　2.通过测定光、加热等对叶绿素稳定性的影响，了解果蔬加工中的护绿措施。二、实验原理　　叶绿素广泛存在于果蔬等绿色植物组织中，并在植物细胞中与蛋白质结合成叶绿体。当植物细胞死亡后，叶绿素即游离出来，游离叶绿素很不稳定，对光、热较敏感；在酸性条件下叶绿素生成绿褐色的脱镁叶绿素，在稀碱液中可水解成鲜绿色的叶绿酸盐以及叶绿醇和甲醇。高等植物中叶绿素有两种：叶绿素a和b，两者均易溶于乙醇、乙醚、丙酮和氯仿。叶绿素的含量测定方法有多种，其中主要有：　　

2、1.原子吸收光谱法：通过测定镁元素的含量，进而间接计算叶绿素的含量。　　2.分光光度法：利用分光光度计测定叶绿素提取液在最大吸收波长下的吸光值，即可用朗伯—比尔定律计算出提取液中各色素的含量。　　叶绿素a和叶绿素b在645nm和663nm处有最大吸收，且两吸收曲线相交于652nm处。因此测定提取液在652nm波长下的吸光值，并根据经验公式可计算出叶绿素含量。三、仪器、原料和试剂　仪器：S54紫外可见分光光度计、恒温水浴锅、天平、研钵、小漏斗、滤纸、烧杯、容量瓶、试管、量筒、刻度管。　　原料：菠菜　　试剂：1.丙酮；2.

3、石英砂；3.碳酸钙粉；4.硫酸铜晶体；5.0.1mol/LNaOH6.0.1mol/LHCL四、操作步骤　　1.将菠菜洗净擦干，称取菜叶5g，放入研钵中，加少量石英砂(0.5g~1g)和25ml冷丙酮，研成均浆，倒入100ml容量瓶中，再用丙酮定容至100ml。充分振摇后用滤纸过滤。即为叶绿素提取液。取提取液在652nm处测其吸光度。以95％丙酮为空白调零。　　2．光对叶绿素稳定性的影响取两支试管，编为1号管和2号管，分别取5ml叶绿素提取液中注入1号管和2号管，一支置暗处,一支置强光下,2h后,分别在分光光度计652

4、nm处测定其吸光值。3.热对叶绿素稳定性的影响取5支试管，编号为1、2、3、4、5号，分别取5ml叶绿素提取液注入其中，再分别于40℃、50℃、60℃、70℃、80℃的水浴中加热10min，加热后，待冷至室温后在625nm处测定其吸光值。4.酸碱介质对叶绿素稳定性的影响分别取叶绿素提取液5ml与两支试管中，一份滴加0.1mol/L盐酸，一份滴加0.1mol/LNaOH溶液，观察提取液颜色变化情况。5.叶绿素分子中的替代作用去叶绿素提取液于试管中，然后逐滴加入浓盐酸，直至溶液变为褐色，接着向试管中加入硫酸铜晶体少许，放入

5、沸水浴中加热10min，观察提取液颜色变化。五、计算　　叶绿素总量（mg/g鲜重）=A652×V×1000∕m×34.5A652---表示在652nm波长下叶绿素提取液的吸光度值；V---叶绿素乙醇提取液的最终体积，mL；m---所有蔬菜鲜重，g.六、记录实验结果项目A652吸光值提取液体积V(ml)样品重量/g叶绿素含量(mg/g鲜重)叶绿素颜色变化酸碱替代作用颜色变化光对叶绿素稳定性的影响项目1号2号吸光值叶绿素含量（mg/g鲜重）热对叶绿素稳定性的影响项目1号2号3号4和5号吸光值叶绿素含量（mg/g鲜重）