叶绿素的提取实验报告

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1、植物叶中色素的提取和柱色谱分离实验报告一．实验目的1、学习从植物中提取色素的方法。2、学习柱色谱(层析)的原理及其操作方法。3、掌握天然药物化学实验报告的一般写法。二．实验原理1、绿色植物叶中含有叶绿素(绿)、胡萝卜素(橙)和叶黄素(黄)等多种天然色素。各种色素能溶解在有机溶剂（无水乙醇等）中形成溶液，使色素从生物组织中脱离出来。2、柱色谱是通过色谱柱来实现分离的。在色谱柱内装有固体吸附剂(固定相)如氧化铝或硅胶。液体样品从柱顶加入，当液体流经吸附剂时，由于吸附剂表面对液体中各组分吸附能力不同而按一定的顺

2、序吸附。然后从柱顶加入洗脱剂(流动相)，样品中的各组分随洗脱剂按一定的顺序从色谱柱下端流出，根据不同颜色分段收集。吸附剂，常用吸附剂有氧化铝、硅胶、氧化镁等。吸附剂对化合物的吸附能力与分子的极性有关，极性越强，吸附能力越大，分子中含有极性较大的基团，其吸附能力也越强。溶剂，溶剂分为溶解样品的溶剂和洗脱剂。选择溶剂时还要考虑到被分离物各组分的极性和溶解度。通常是先将要分离的样品溶于非极性溶剂中，从柱顶加入柱中。然后用稍大极性的溶剂使各组分在柱中形成若干谱带。再用极性更大的溶剂洗脱被吸附的物质。为了提高洗脱效

3、果，有时也使用混合溶剂。在本实验中色素成分在不同比例混合洗脱剂的作用下可以分离出来。三．实验仪器及试剂仪器：烧杯、量筒、色谱柱、分液漏斗、玻璃棒、干燥的锥形瓶、滤纸、旋转蒸发仪、酸式滴定管、布氏漏斗、研钵、胶头滴管、剪刀、天平试剂：50g新鲜植物叶、中性氧化铝、甲醇(95％，分析纯)、乙醇、石油醚(60～90％)、丙酮、无水硫酸钠、正丁醇、50g新鲜植物叶、四．实验内容1.绿叶色素的提取把新鲜绿叶洗净晾干或用滤纸吸干，称取5g绿叶，剪碎后放入研钵，再加入10mL乙醇。研磨后用布氏漏斗抽滤，弃去滤渣。将滤液

4、放回研钵，每次用10mL3:2（体积比）的石油醚-甲醇混合液萃取两次，每次需加以研磨并且抽滤。把两次滤液合并，转入分液漏斗中。用5mL水洗涤两次，弃去水-甲醇层,洗涤时要轻轻旋荡，以防止产生乳化。石油醚层转入干燥的锥形瓶中用无水硫酸钠干燥。干燥后的液体在旋转蒸发仪上蒸除石油醚至体积约2mL左右。2.柱色谱分离色素取一支干净的酸式滴定管，向柱内加入石油醚至柱高约1/2处。再缓慢加入氧化铝，并打开活塞，控制流出速度约为2滴/s，并保持液面不低于固定相。打开下端活塞，放出溶剂，直到氧化铝表面溶剂剩下1－2mm高

5、时关上活塞。注意，在任何情况下，氧化铝表面不得露出液面。色素浓溶液用滴管小心加到色谱柱顶部，并要旋转加入。加完后打开下部活塞，让液面下降到柱面以下1mm左右关闭活塞。旋转加入数滴石油醚，重新打开活塞使液面下降，重复几次使有色物质全部进入柱体内，待色素全部进入柱体后，观察并记录下此时实验的现象。在柱顶小心加洗脱剂—石油醚-丙酮溶液9:1（体积比）。打开活塞，让洗脱剂逐滴放出，层析即开始进行，用试管收集。当第一个有色成分即将滴出时，取另一试管收集，得橙黄色溶液，它就是胡萝卜素。用石油醚-丙酮7:3（体积比）作

6、洗脱剂，分出第二个黄色带，它是叶黄素（1）。再用丁醇-乙醇-水3:1:1（体积比）洗脱叶绿素a（蓝绿色）和叶绿素b（黄绿色）。五．实验结论与分析1、本次实验总共重复了三次，第一次采用的是蚕豆叶，提取的色素浓液很少所以色素带分层现象不明显；第二次采用的是野草的嫩叶，提取出来的主要是淡黄色的色素，叶绿素较少；第三次因为时间关系采用了少量的是莴苣叶比较前两次实验，很遗憾实验分层现象还是不明显。通过不同品种的原材料的选取，以及用量的多少对实验很关键，总的来说还是用适当的过量的绿叶较好，可以避免转移过程中的损失，而

7、且绿叶最好是深绿色的肉质植物。2、研磨时加入适量的乙醇有助于打开植物细胞壁，有利于色素的流出，第一次采用的是甲醇，第二次是石油醚，第三次是乙醇，实验结果从提取的汁液来看第三次的汁液明显是深绿色，第一次是浅绿，第二次是淡黄色。通过查阅文献和实验比较，提取色素过程中，由于抽滤时不好控制，非极性溶剂难免会被抽去，且在几次转移中损失较多，程序繁杂。用浸泡法操作简便易行，损失少，产率高。因甲醇与乙醇的极性相近，乙醇易得，无毒，用95％乙醇通过浸泡的方法提取菠菜色素为此实验的优化条件。3、固定相的选择也是一个影响实验

8、结果的关键，此次试验我们组并未将氧化铝和硅胶两种固定相一起作比较，但从别组两种比较的结果来看，通过比较，中性氧化铝虽用量比硅胶稍大，但其装柱较容易，只要保持比较均匀的速度从漏斗中加入，且轻轻敲打柱身，柱内气泡就较少，柱子装的也比较实，色带的分离效果比硅胶明显。使用硅胶做固定相时，虽用量较少，但在装柱过程中，容易出现大量泡，会影响色带的分离。为消除气泡，采用吸耳球对柱子加压，将气泡挤出柱体。但这种方法容易导致柱子的堵塞，而且在加