叶绿素提取和分离实验.doc

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1、植物叶绿体中色素的提取与分离　实验原理：1、色素不溶于水，易溶解在无水乙醇等有机溶剂2、色素的溶解度不同，随层析液在滤纸上扩散速度不同，从而达到分离目的。操作步骤：　　1．称取新鲜叶子2g，放入研钵中加丙酮5ml，少许碳酸钙(防止叶绿素被破坏）和石英砂（帮助研磨），研磨成匀浆，再加丙酮5ml，然后以漏斗过滤之，即为色素提取液。　　2．取准备好的滤纸条（2×20cm），将其一端剪去两侧，中间留一长约1.5cm，宽约0.5cm的窄条，并在滤纸剪口上方折叠出一条直线，作为画滤液细线的基准线。　　3．用毛细吸管沾少许滤液在折线上描绘4~5次，注意

2、要画得匀、直、细，每次画完细线要等其自然变干后再画第二根线。4．在大试管中加入四氯化碳3梍5ml及少许无水硫酸钠（即层析液）。然后将滤纸条固定于软木塞上，插入试管内，使窄端浸入溶剂中（色素点要略高于液面，滤纸条边缘不可碰到试管壁），盖紧软木塞，直立于阴暗处进行层析。　　经过0.5—1小时后，观察分离后色素带的分布。最上端橙黄色为胡萝卜素，其次黄色为叶黄素，再下面蓝绿色为叶绿素a，最后的黄绿色为叶绿素b。注意事项　　纸层析法中所用的有机溶剂如丙酮等，一般有挥发性、并有一定毒性，使用时要注意密封层析，避免吸入过多有害挥发物。纸层析法依据极性相

3、似相溶原理，是以滤纸纤维的结合水为固定相，而以有机溶剂作为流动相。由于样品中各物质分配系数不同，因而扩散速度不同，从而达到分离的目的。纸层析法又称纸色谱法。以纸为载体的色谱法。固定相一般为纸纤维上吸附的水分，流动相为不与水相溶的有机溶剂；也可使纸吸留其他物质作为固定相，如缓冲液，甲酰胺等。将试样点在纸条的一端，然后在密闭的槽中用适宜溶剂进行展开。当组分移动一定距离后，各组分移动距离不同，最后形成互相分离的斑点。将纸取出，待溶剂挥发后，用显色剂或其他适宜方法确定斑点位置。纸层析法纸层析法是以纸上所吸附的水作固定相，用与水不相溶的溶剂作展开剂

4、。将欲分离的样品液体点在纸条上晾干。当流动相沿纸条移动时，带动组分中的各组分以不同的速率向前移动，在移动时间内，不同的组分被带到纸上的不同部位，出现层析现象，以达到分离的目的。