欢迎来到天天文库
浏览记录
ID:54413531
大小:14.50 KB
页数:1页
时间:2020-04-16
《叶绿素提取和分离实验.doc》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、植物叶绿体中色素的提取与分离 实验原理:1、色素不溶于水,易溶解在无水乙醇等有机溶剂2、色素的溶解度不同,随层析液在滤纸上扩散速度不同,从而达到分离目的。操作步骤: 1.称取新鲜叶子2g,放入研钵中加丙酮5ml,少许碳酸钙(防止叶绿素被破坏)和石英砂(帮助研磨),研磨成匀浆,再加丙酮5ml,然后以漏斗过滤之,即为色素提取液。 2.取准备好的滤纸条(2×20cm),将其一端剪去两侧,中间留一长约1.5cm,宽约0.5cm的窄条,并在滤纸剪口上方折叠出一条直线,作为画滤液细线的基准线。 3.用毛细吸管沾少许滤液在折线上描绘4~5次,注意
2、要画得匀、直、细,每次画完细线要等其自然变干后再画第二根线。4.在大试管中加入四氯化碳3梍5ml及少许无水硫酸钠(即层析液)。然后将滤纸条固定于软木塞上,插入试管内,使窄端浸入溶剂中(色素点要略高于液面,滤纸条边缘不可碰到试管壁),盖紧软木塞,直立于阴暗处进行层析。 经过0.5—1小时后,观察分离后色素带的分布。最上端橙黄色为胡萝卜素,其次黄色为叶黄素,再下面蓝绿色为叶绿素a,最后的黄绿色为叶绿素b。注意事项 纸层析法中所用的有机溶剂如丙酮等,一般有挥发性、并有一定毒性,使用时要注意密封层析,避免吸入过多有害挥发物。纸层析法依据极性相
3、似相溶原理,是以滤纸纤维的结合水为固定相,而以有机溶剂作为流动相。由于样品中各物质分配系数不同,因而扩散速度不同,从而达到分离的目的。纸层析法又称纸色谱法。以纸为载体的色谱法。固定相一般为纸纤维上吸附的水分,流动相为不与水相溶的有机溶剂;也可使纸吸留其他物质作为固定相,如缓冲液,甲酰胺等。将试样点在纸条的一端,然后在密闭的槽中用适宜溶剂进行展开。当组分移动一定距离后,各组分移动距离不同,最后形成互相分离的斑点。将纸取出,待溶剂挥发后,用显色剂或其他适宜方法确定斑点位置。纸层析法纸层析法是以纸上所吸附的水作固定相,用与水不相溶的溶剂作展开剂
4、。将欲分离的样品液体点在纸条上晾干。当流动相沿纸条移动时,带动组分中的各组分以不同的速率向前移动,在移动时间内,不同的组分被带到纸上的不同部位,出现层析现象,以达到分离的目的。
此文档下载收益归作者所有