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1、58微生物学杂志2004年11月第24卷第6期JOURNALOFMICROBIOLOGYNov.2004Vol.24No.6·研究简报·＊表面活性剂对嗜热脂肪芽孢杆菌产高温蛋白酶的影响12322＊＊刘军,陈向东,戴玄,唐兵,彭珍荣(1.武汉工业学院生物与化学工程系,湖北武汉430023;2.武汉大学生命科学学院,湖北武汉430072;3.重庆师范学院,重庆408003)摘要研究了表面活性剂对嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillusstearothermophilus)WF146产胞外高温蛋白酶的影响。结果表明,表面活性剂Tween-80在0.05%～0.1%(体积比)
2、浓度范围内对WF146产酶有一定的促进作用。在培养基中添加0.1%Tween-80可使发酵液酶活提高12.7%,Tween-20和TritonX-100则抑制嗜热脂肪芽孢杆菌WF146产酶。另外,TritonX-100抑制嗜热脂肪芽孢杆菌WF146生长,而Tween-80和Tween-20不抑制其生长。关键词嗜热脂肪芽孢杆菌;高温蛋白酶;表面活性剂中图分类号Q93文献标识码B文章编号1005-7021(2004)06-0058-02蛋白酶是一类常用的工业和研究用酶。它在酵母膏0.4,蛋白胨0.8,NaCl0.3,琼脂1.5,pH洗涤剂、制革脱毛、蚕丝脱胶、有机合
3、成、酒类澄7.2。②Fd培养基:葡萄糖1,酵母膏0.2,蛋白胨清、明胶及蛋白胨生产、肉质嫩化、医药等方面广0.02,NaCl0.2,CaCl0.2,K2HPO40.5,KH2PO4为应用,占酶制剂市场65%的份额。目前工业上0.125,MgSO4·7H2O0.001,FeSO40.0001,所用的蛋白酶主要是常温蛋白酶。高温蛋白酶由pH8.0。于具有耐热、耐变性剂、耐有机溶剂等特性,有重1.2方法[1]要的应用价值。嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus1.2.1蛋白酶活力的测定stearothermophilus)WF146是本实验室筛选到的1.2.2表面活性剂对
4、嗜热脂肪芽孢杆菌WF1461株产高温蛋白酶的高产菌株。该菌株所产蛋白产酶的影响将WF146菌种在PYS斜面上58酶具有良好的热稳定性和pH稳定性,可用于水℃活化24h,从中挑取1环菌苔接种于装有50解猪血蛋白生产氨基酸及水解虾壳生产甲壳素,mLPYS液体培养基的250mL的三角烧瓶中,于[1～7]是1株具有重要应用价值的野生菌株。但58℃,250r/min活化培养16h。然后接种一定是,高温蛋白酶一般产量低、生产成本高。为了实量的WF146PYS菌悬液于装有50mLFd发酵现它们的商业价值,必须提高高温蛋白酶的产量。培养基的250mL的三角瓶中。在Fd培养基中据
5、报道,表面活性剂能够改变细胞膜的通透性,有添加不同浓度的表面活性剂Tween-80,Tween-20助于菌体将酶分泌到胞外,从而提高产酶或TritonX-100,以不添加表面活性剂的Fd做对[8～10]量。为此,研究了不同的表面活性剂对嗜热照,在58℃,250r/min发酵培养48h。收集经发脂肪芽孢杆菌(B.stearothermophilus)WF146产酵的菌悬液,3000r/min离心15min,取上清液胞外高温蛋白酶的影响,希望能够进一步提高该测酶活。菌株的产酶能力,也为表面活性剂在微生物发酵2结果与分析产酶和酶的实际应用提供有价值的资料。2.1Twe
6、en-80对WF-146产酶的影响1材料与方法表1表面活性剂对WF-146产酶的影响1.1材料添加浓度/(体积分数,%)表明活性剂1.1.1菌株嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus0.00.010.050.10.5stearothermophilus)WF146为本实验室分离鉴Tween-80相对酶活10098.7104.7112.477.2[1]定。Tween-20相对酶活10079.642.833.515.9TritonX-100相对酶活10010.57.03.81.71.1.2培养基(质量分数,%)①PYS培养基:收稿日期:2004-06-15作者简介:刘军
7、男,博士。现研究方向为应用微生物及生物技术。＊武汉市晨光计划资助项目(985003077)＊＊通讯作者6期刘军等:表面活性剂对嗜热脂肪芽孢杆菌产高温蛋白酶的影响59产酶有强烈的抑制作用。在添加0.01%,0.05%,0.1%,0.5%TritonX-100时,它们的发酵液单位体积的酶活分别是其各自对照组的10.5%,7.0%,3.8%,1.7%。即随着TritonX-100添加量的增加,这种抑制作用越大。在实验中发现,TritonX-100对WF146菌体的生长有明显的抑制作用。在加有TritonX-100的培养基中,菌体生长很少,发酵液透明。而且,Triton
8、100图1表面活性剂对W
