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时间:2020-08-09
《蛋白灰度分析软件使用.ppt》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、蛋白灰度分析蛋白灰度分析软件蛋白灰度分析软件有:Image-ProPlus,QuantityOne,ImageJ等~~(1)Image-ProPlus综合性能最好,操作简便结果可靠!因为它有强大的IOD算法,能准确反应蛋白灰度~~但需要靠魔棒或轨迹法选取目的蛋白区域,有一定的主观性,不过蛋白灰度测定本身就是半定量分析-----测量值本身就没有一定标准,不同软件测量值不同,即使相同软件重复测量数值也不一定相同,因此只要测定数值能反应目的蛋白变化趋势,测量值相对偏差不大即可~~~(2)QuantityOne:有泳道-轨迹测定法,等高线/手绘选
2、取目的区域测定法等方法ⅰ.泳道-轨迹测定法:先剔除一系列背景,再选择泳道(lane),然后分析条带(band),最后使用高斯建模得出灰度分析值(GaussModeltrace)特点:感觉比较科学,重复性好,但十分繁琐,而且有时不能正确反应灰度。ⅱ.等高线-手绘选取目的区域测定法:通过等高线或手绘选取目的蛋白区域,最简便,但重复性不太好。(3)ImageJ最坑爹,它用魔棒选取区域测定灰度,可是有时很难选中所需区域,而且方法繁琐,不推荐!!Image-ProPlus分析蛋白灰度教程说明:目的蛋白的灰度=目的蛋白IOD值/相应内参IOD值1.
3、使用Photoshop剪切出目的区域(只含westernbolt条带,如图),保存为TIFF格式文件。2.Image-ProPlus打开文件,剔除背景:(1)放大镜放大目的区域(2)Measure---calibration---intensity---options----image,选择背景最大value值------ok-------ok----system----close(3)Measure---count/size---measure---selectmeasurements,选择IOD为测量值,调整结果显示方式:Optio
4、ns-labelstyle改为mesurement,选择IOD为显示值。(4)接下来有2种方法选择目的蛋白区域(即找出AOI,areaofinterest,IPP核心元件):魔棒和手绘轨迹法。(5)count/size---edit-----convertAOItoobject---得出IOD值(6)若测下一条带,则点NEWAOI按钮,再按以上方法选择AOI(7)可以count/size---view---measurementdata显示或输出测量值Thankyou
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