DNA重组技术的基本工具课件知识讲稿.ppt

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1、人教版选修3专题1基因工程课题1DNA重组技术的基本工具定向基因改造设想设想一能否让禾本科的植物也能够固定空气中的氮？能否让细菌“吐出”蚕丝？设想二能否让微生物产生出人的胰岛素、干扰素等珍贵的药物？设想三经过多年的努力，科学家于20世纪70年代创立了可以定向改造生物的新技术——基因工程。基因工程的别名操作环境操作对象操作水平基本过程结果基因拼接技术或DNA重组技术生物体外基因DNA分子水平人类需要的基因产物剪切→拼接→导入→表达基因工程培育抗虫棉的简要过程：普通棉花(无抗虫特性)苏云金芽孢杆菌提取抗

2、虫基因棉花细胞(含抗虫基因)棉花植株(有抗虫特性)上述培育抗虫棉的关键步骤是什么？重组DNA导入形成基因工程培育抗虫棉的关键步骤：关键步骤一：抗虫基因从苏云金芽孢杆菌细胞内提取出来关键步骤二：形成重组DNA关键步骤三：重组DNA导入受体(棉花)细胞解决培育抗虫棉的关键步骤需要哪些工具？（二）DNA重组技术的基本工具关键步骤一的工具：关键步骤二的工具：关键步骤三的工具：分子手术刀—限制性内切酶分子缝合针—DNA连接酶分子运输车—运载体识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的

3、两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。主要是从原核生物中分离纯化出来的一种酶。能将外来的DNA切断，由于这种切割作用是在DNA分子内部进行的，故名限制性内切酶。4000种。1、来源：2、种类：3、作用：4、结果：形成两种末端一、“分子手术刀”——限制性核酸内切酶粘性末端平末端大肠杆菌(E.coli)的一种限制酶能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开。限制酶什么叫黏性末端？“分子手术刀”——限制性核酸内切酶限制酶什么叫黏性末端？被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配

4、对，这样的切口叫黏性末端。什么叫平末端？当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，切开的DNA两条单链的切口，是平整的，这样的切口叫平末端。限制性内切酶1、特点：特异性，即识别特定核苷酸序列，在特定的切点切割。2、分布：主要在微生物中。3、结果：产生黏性末端（碱基互补配对）、平末端。4、举例：大肠杆菌的一种限制酶（EcoRⅠ)能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开形成黏性末端，SmaⅠ能识别CCCGGG序列，并在C和G之间切割形成平末端。要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个

5、黏性末端？要切两个切口，产生四个黏性末端。如果把两种来源不同的DNA用同一种限制酶来切割，会怎样呢？会产生相同的黏性末端，然后让两者的黏性末端黏合起来，就可以合成重组的DNA分子了。目前被较广泛提取使用的目的基因有：苏云金杆菌抗虫基因、人胰岛素基因、人干扰素基因、种子贮藏蛋白基因、植物抗病基因等。㈡　基因操作的基本步骤１、提取目的基因——将　需要的基因从供体生物　的细胞内提取出来。供体生物细胞取出DNA用限制酶剪去多余部分目的基因限制酶“分子缝合针”——DNA连接酶DNA连接酶可把黏性末端之间的

6、缝隙“缝合”起来，是把梯子两边扶手的断口连接起来，这样一个重组的DNA分子才能形成。“分子缝合针”——DNA连接酶根据酶的来源不同，可以将这些酶分为两类：1、从大肠杆菌中分离得到：E.coliDNA连接酶，只能将双链DNA片段互补的粘性末端之间连接。2、从T4噬菌体中分离到：T4连接酶，既可以“缝合”双链DNA片段互补的粘性末端，又可以“缝合”双链DNA片段的平末端，但连接平末端之间的效率比较低。AATTGCCTTAAG2、目的基因与运载体结合用与提取目的基因相同的限制酶切割质粒使之出现一个切口，将

7、目的基因插入切口处，让目的基因的黏性末端与切口上的黏性末端互补配对后，在连接酶的作用下连接形成重组DNA分子。外源基因(如抗虫基因)怎样才能导入受体细胞(如棉花细胞)？基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”。运载体1、作用：2、条件：3、种类：质粒、噬菌体和动植物病毒。4、质粒的特点要让一个从甲生物细胞内取出来的基因在乙生物体内进行表达，首先得将这个基因送到乙生物的细胞内去。能将外源基因送入细胞的工具就是运载体。将外源基因送入受体细胞。作为运载体必须具备哪些条件？1、能够在宿主细胞中复制并稳定地保

8、存。2、具多个限制酶切点，以便与外源基因连接。3、具有某些标记基因，便于进行筛选。如抗菌素的抗性基因、产物具有颜色反应的基因等。大肠杆菌的质粒：最常用的质粒是大肠杆菌的质粒，其中常含有抗药基因，如四环素的标记基因。质粒的存在与否对宿主细胞生存没有决定性作用，但复制只能在宿主细胞内成。质粒的特点1、细胞染色体（或拟核DNA分子）外能自主复制的小型环状DNA分子；2、质粒的存在对宿主细胞无影响；3、质粒的复制只能在宿主细胞内完成。3、将目的基因导入受体细胞并使之扩增导入扩