生物采样方法、检验技术与注意事项课件.ppt

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1、医院环境微生物采样方法、检验技术与注意事项复旦大学附属中山医院高晓东第三十一条环境卫生学监测：包括对空气、物体表面和医护人员手的监测。医院应每月对手术室、重症监护病房／室（ICU）、产房、母婴室、新生儿病房、骨髓移植病房、血液病房、血液透析室、供应室无菌区、治疗室、换药室等重点部门进行环境卫生学监测。当有医院感染流行，怀疑与医院环境卫生学因素有关时，应及时进行监测。第三十六条 出现医院感染流行或暴发趋势时，应采取下列控制措施：一、临床科主必须及时查找原回，协助调查和执行控制措施。二、医院感染管理科必须及时进行流行病学调查处理，基本步骤为；1、证实流行或暴发2、

2、查找感染源：对感染病人、接触者、可疑传染源、环境、物品、医务人员及陪护人员等进行病原学检查。3、查找引起感染的因素4、制定和组织落实有效的控制措施5、分析调查资料6、写出调查报告。空气微生物采样及检验方法物体表面微生物采样及检验方法医护人员手表面采样及检验方法使用中消毒剂与无菌器械保存液医疗器械微生物采样及检验方法水中微生物的采样及检验方法空气微生物监测空气污染的监测得到足够重视空气微生物研究的范围在不断扩大空气微生物的诊断在不断提高控制空气微生物的方法不断更新对空气微生物采样方法认识不断提高空气微生物采样方法一、沉降法二、浮游菌测定法沉降法重力沉降静电沉降热

3、沉降沉降平皿法室内面积不超过30m2，在对角线上设里、中、外三点，里、外点位置距墙1m；室内面积超过30m2，设东、西、南、北、中5点，周围4点距墙1m。采样时，将含营养琼脂培养基的平板（直径9cm）置采样点（约桌面高度），打开平皿盖，使平板在空气中暴露5min。。空气采样（1）选择有代表性的采样点，一般在室内四角及室中央，放置含营养琼脂的平皿。（2）打开皿盖（将皿盖置于平皿底下，不可仰放，以防污染），将有培养基的平皿，暴露于空气5分钟（视空气清洁程度而定），采样毕合上皿盖，记录采样时间。（3）将已采集的培养基在6h内送实验室，置于37℃温箱培养48小时。（4

4、）记录5个平皿的菌落总数。结果计算100cm2琼脂面积上，5分钟所降落的菌落数，相当于10L空气所含细菌数，计算结果如下：t——平皿暴露于空气中的时间（分钟）N——培养后，平皿上的菌落总数A——所用平皿的面积（cm2）假如100cm2的平皿在空气中暴露5min即相当于10L空气中的细菌数结果判定Ⅰ类区域：细菌总数≤10cfu/m3，未检出致病菌为消毒合格；Ⅱ类区域：细菌总数≤200cfu/m3，未检出致病菌为消毒合格；Ⅲ类区域：细菌总数≤500cfu/m3，未检出致病菌为消毒合格。缺点1、平板沉降法属重心沉降，此法只能采集10μm左右的粒子，而且不能作精确定量

5、。因为就单个细菌而言，最大只有几个μm，小到1μm以下，所以它只能采集到附着于各种尘埃和气溶胶表面的细菌，难以采集到悬浮的细菌，而经空气感染更多的是由于悬浮于空气中的细菌所致。缺点2、采样时受周围气流、粒经大小和粒经沉降速度等因素影响，不能准确的反应空气细菌的分布水平。3、奥梅良斯基公式规定：假如100cm2的平皿在空气中暴露5min即相当于10l空气中的细菌数，此值是一假定值，无法定量，所以公式中的矫正数也是很不准确的。浮游菌测定法撞击式空气微生物采样法离心式空气微生物采样法洗刷空气微生物采样法过滤空气微生物采样法温差空气微生物采样法静电或冲击空气微生物采样

6、法撞击式空气微生物采样法采样器分别置于室内对角和中央共3个点。设置采样时间为每点2min，空气流量为25l／min，细菌培养方法同沉降法。计算公式细菌数(cfu/m3)=n/FT×1000F为采气流量（L／min）；T为采样时间（min）；n为平均菌落数（CfU／平皿）。撞击式空气采样仪FA-1型多级撞击式空气微生物采样器FA-2型撞击式空气微生物采样器FA-1型多级撞击式空气微生物采样器整个仪器是由采样器以及抽气泵、流量计、玻璃平皿所组成。采样器是6层有微小孔眼的铝合金圆盘。圆盘下放琼脂平皿，每圆盘间有密封胶圈，在通过三个弹簧卡子把圆盘牢固地联在一起。每个圆

7、盘上有400个成环行排列、逐层减小、尺寸精确的小孔，标准采样流量为1立方呎（28.3L/min）。FA-2型撞击式空气微生物采样器该采样器是依据安德森采样器而设计制造的，它模拟人体呼吸道的解剖结构及其空气动力学特征，采用惯性撞击原理，将悬浮在空气中的微生物粒子，按大小等级分别收集在采样介质表面上，然后供培养及做进一步的微生物分析，求出空气微生物粒子数量及其大小分布的特征。浮游菌测定法撞击式空气微生物采样法离心式空气微生物采样法洗刷空气微生物采样法过滤空气微生物采样法温差空气微生物采样法静电或冲击空气微生物采样离心式空气微生物采样法当采样器通电后，借助采样器内叶

8、轮的高速旋转，把距离40cm范围内的空