课件42微生物检验中的采样与样品制备

《课件42微生物检验中的采样与样品制备》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、食品检验食品检验微生物实验室要求及样品制备微生物检查验中的采样与样品制备提出微生物检验中的采样与样品制备项目任务设想，分发学习任务第二节微生物检查验中的采样与样品制备范围本标准规定了食品微生物学检验基本原则和要求。本标准适用于食品微生物学检验。第二节微生物检查验中的采样与样品制备第四章实验室基本要求环境人员设备培养基和试剂设备的要求温控设备(培养箱、冰箱、冰冻机、烤箱)、测量器具(温度计、计时器、天平、酸度计、菌落计数器等)、定容设备(吸管、自动分液器、微量移液器等)、除菌和灭菌设备(超净工作台或生物安全柜、高压灭菌锅)、其他设备(显微镜、离心机

2、、均质器等)。无菌室基本要求1)无菌室、超净工作台应设在较洁净的环境内，附近无污染源。无菌室基本要求(2)室内六面应光滑平整、无缝隙，不起灰、不落尘，耐腐蚀、易清洗。墙与地面、墙壁之间相接处应有一定弧度，不留死角。室内门窗结构应密合，并尽量减少活动窗口面积。无菌室基本要求(3)无菌室外应设缓冲间，其结构同无菌室，做进入无菌室之前的更衣戴帽等准备工作。无菌室基本要求(4)无菌室内按2～2.5W／m3设置紫外线杀菌灯。应定期检查杀菌效果，对失效者应及时更换。(5)无菌室关键操作点及超净工作台操作区的净化级别应为100级，即平均菌落数≤1个，不小于0.

3、5μm粒子数≤3.5个／L。(6)室内温度宜控制在20~24℃，湿度45％～60％。无菌室的使用与管理(1)无菌室应保持清洁整齐，室内仅存放最必需的检验用具如酒精灯、酒精棉、火柴、镊子、接种针、接种环、玻璃铅笔等。无菌室的使用与管理(2)室内检验用具及桌凳等位置保持固定，不随便移动。(3)每2～3周用2％石炭酸水溶液擦拭工作台、门、窗、桌、椅及地面，然后用甲醛加热或喷雾灭菌，最后紫外灯杀菌0.5h。(4)定期检查室内空气无菌状况，细菌数应控制在10个以下，发现不符合要求时，应立即彻底消毒灭菌。无菌室无菌程度的测定方法：取普通肉汤琼脂平板、改良马丁

4、培养基平板各3个(平板直径均9cm)，置无菌室各工作位置上，开盖暴露30min，然后倒置进行培养，测细菌总数应置37℃温箱培养48h；测霉菌数则应置27℃温箱培养5天。细菌、霉菌总数均不得超过10个为合格。(5)无菌室杀菌前，应将所有物品置于操作之部位(待检物例外)，然后打开紫外灯杀菌30min，时间一到，关闭紫外灯待用。(6)进入无菌室前，必须于缓冲间更换消毒过的工作服、工作帽及工作鞋。(7)操作应严格按照无菌操作规定进行，操作中少说话，不喧哗，以保持环境的无菌状态。3．器材及场所的灭菌消毒微生物检验用器材及场所必须进行灭菌或消毒处理，不同对象

5、采用不同的处理方法。(1)高压蒸汽灭菌工作服、口罩、稀释液等，置高压杀菌锅内，一般采用121℃灭菌30min，当然不同的培养基有不同的要求，应分别处理。(2)火焰灭菌接种针、接种环等可直接火焰灭菌。器材及场所的灭菌消毒(3)高温干燥灭菌各种玻璃器皿、注射器、吸管等，置于干燥箱中160℃灭菌，2h。(4)一般消毒无菌室内的凳、工作台、试管架、天平、待检物容器或包装均无法进行灭菌，必须用其他方法进行消毒处理，采用2％石炭酸或来苏尔水溶液擦拭消毒，工作人员的手也用此法进行消毒。(5)空气的消毒开启紫外灯照射30~60min即可。4．准备工作操作要领(1

6、)先进行无菌室空间的消毒，开启紫外灯30~60min。(2)检验用的有关器材，搬入无菌室前必须分别灭菌消毒。4．准备工作操作要领(3)操作人员必须将手清洗消毒，穿戴好无菌工作衣、帽和鞋，才能进入无菌室。在所有可能产生潜在感染性物质喷溅的操作过程中，操作人员应将面部、口和眼遮住或采取其他防护措施。(4)进入无菌室后再一次消毒手部，然后才进行检验操作。5．操作过程注意事项(1)动作要轻，不能太快，以免搅动空气增加污染；玻璃器皿也应轻取轻放，以免破损污染环境。为了避免感染性物质从移液管中滴出而扩散，在工作台面应当放置一块浸有消毒液的布或吸有消毒液的纸，

7、使用后将其按感染性废弃物处理。(2)操作应在近火焰区进行。5．操作过程注意事项(3)接种环、接种针等金属器材使用前后均需灼烧，灼烧时先通过内焰，使残物烘干后再灼烧灭菌。为了避免被接种物洒落，微生物接种环的直径应为2～3mm并完全封闭，柄长度应小于6cm以减小抖动。使用封闭式微型电加热器消毒接种环，能够避免在明火上加热所引起的感染性物质爆溅。最好使用不需要再进行消毒的一次性接种环。5．操作过程注意事项(4)使用吸管时，切勿用嘴直接吸、吹吸管，而必须用洗耳球操作。不能向含有感染性物质的溶液中吹人气体。(5)观察平板时不要开盖，如欲蘸取菌落检查时，必须

8、靠近火焰区操作，平皿盖也不能大开，而是上下盖适当开缝。5．操作过程注意事项(6)进行可疑致病菌涂片染色时，应使用夹子夹持玻片，切勿用手直