实验总结教学文稿.doc

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1、实验总结精品文档一．耗材准备1实验用品准备①胎牛血清100ml收到之后将血清放在-2O℃冰箱保存，次日放入-4℃冰箱中解冻，解冻1天后，置室温下溶解后装在15ml离心管中，每管10ml,在溶解过程中药规则的摇晃均匀（不要造成气泡）减少沉淀发生，一般血清从厂商购买已经无菌，不需要再过滤除菌，然后将分装的血清做好标记，存入-4℃中保存备用。DMEM（高）培养基收到放到-4℃冰箱中保存。1640培养基收到放到-4℃冰箱中保存。胰蛋白酶-EDTA100ml收到后放-20℃冰箱保存，然后装在15ml离心管中，每管10ml,做好标记，放-20℃冰箱保存。血清瓶100ML()个，。收集于网络，如有

2、侵权请联系管理员删除精品文档一、新的玻璃器皿的洗消： 1.自来水刷洗，除去灰尘。 2.烘干、泡盐酸：烤箱中烘干，然后再浸入5％稀盐酸中12小时以除去脏物、铅、砷等物。 3.刷洗、烘干：12小时后立即用自来水冲洗，再用洗涤剂刷洗，自来水冲干净后用烤箱烘干。 4.泡酸、清洗：用清洁液（重铬酸钾120g：浓硫酸200ml：蒸馏水1000ml）浸泡12 小时，然后从酸缸内捞出器皿用自来水冲洗15次，最后蒸馏水冲洗3-5次和用双蒸水过3次。 5.烘干、包装：洗干净后先烘干，然后用牛皮纸（油光纸）包装。 6.高压消毒：包装好的器皿装入高压锅内盖好盖子，打开开关和安全阀，当蒸气成直线上升时，关闭安

3、全阀，当指针指向15磅时，维持20-30分钟。 7.高压消毒后烘干 二、旧的玻璃器皿的洗消： 1．刷洗、烘干：使用过的玻璃器皿可直接泡入来苏尔液或洗涤剂溶液中，泡过来苏尔溶液（洗涤剂）的器皿要用清水刷洗干净，然后烘干。 2.泡酸、清洗：烘干后泡入清洁液（酸液），12小时后从酸缸内捞出器皿立即用自来水冲洗（避免蛋白质干涸后粘附于玻璃上难以清洗），再用蒸馏水冲洗3次。 3.烘干、包装：洗干净的器皿烘干后取出用牛皮纸（油光纸）等包装，以便于消毒储存及防止灰尘和再次被污染。 4.高压消毒：包装好的器皿装入高压锅内，盖好盖子，打开开关和安全阀，随着温度的上升安全阀冒出蒸气，当蒸气成直线冒出3-

4、5分钟后，关闭安全阀，气压表指数随之上升，当指针指向15磅时，调节电开关维持20-30分钟即可。（玻璃培养瓶消毒前可将胶帽轻轻盖上） 5.烘干备用：因为高压消毒后器皿会被蒸气打湿，所以要放入烤箱内烘干备用。移液枪头3种型号各（）包。装入枪头盒子里，包装好高压灭菌，备用15天内用完。清链霉素（双抗）100mlDMSO(二甲基亚砜)100ML阴凉干燥处闭光保存。MTT溶液最好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。放4℃避光保存。12-24-96孔板备用25-75培养瓶备用15-50离心管备用0.22滤过器+针管过滤药物时候用，备用移液管3包备用封口胶+标签纸+记号笔完全培

5、养基的配制：RPMI1640培养液85ml+小牛血清10ml+　谷氨酰氨1ml　+抗菌素（青、链霉素）1万单位1ml完全培养液一般由1*合成培养液+10%胎牛或小牛血清+100IU/ml青霉素和100mg/ml链霉素组成。收集于网络，如有侵权请联系管理员删除精品文档二．更换培养液准备：1、仔细检查所培养的细胞，观测是否有污染或发生细胞变性，一经发现，立即丢弃。2、检查培养液的颜色如从红色变为黄色时，或细胞密度较大时估计培养液中的营养物质将耗竭，更换细胞培养液。一般2到3天更换一次，这还要看自己所养细胞状态。3、在超净工作台内吸去培养器皿中的旧培养液，用PBS清洗（冲洗）一两次。另每次

6、倒出后都要将瓶口过一下酒精灯火焰。4、用吸管加入预热至36.5摄氏度到37摄氏度的新鲜完全培养液。完全培养液一般由1*合成培养液+10%胎牛或小牛血清+100IU/ml青霉素和100mg/ml链霉素组成。5、加入培养液的体积和培养器皿表面积之比应在0.2到0.5ml/cm2之间。若培养液层太深则影响氧气的弥散，若高浓度氧气需要细胞培养液层应较浅收集于网络，如有侵权请联系管理员删除精品文档（2mm)。低浓度氧气需求的细胞系培养液层可较深（5mm）。（我自己的操作：一般小培养瓶加5-7ml，大培养瓶加10-15ml)6、把培养细胞放回细胞培养箱中培养。（：在放入培养箱前显微镜下观察一下细

7、胞状态以及细胞是否干净，用酒精喷瓶外壁。放回注意拧松瓶口）细胞传代一、准备工作 1.废液缸2.吸管3.新鲜培养基4.消化液5.PBS液6.15ml离心管7.记号笔8.记录本9无菌陪养瓶10移液管11移液枪和枪头 二、实验步骤 1.打开层流，打开层流间和超净台的紫外线灯，离心管、废液缸和吸管需同时照射； 2.把水浴锅调整到37℃并使其稳定； 3.将胰酶和新鲜培养基放置到水浴锅中，注意防止水面高于瓶肩，10ml液体保持3分钟，（100ml液体保持10分钟，20