细菌抹片的制备.pdf

《细菌抹片的制备.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、实验一实验一细菌抹片的制备、染色及细菌抹片的制备、染色及细菌显微形态的观察细菌显微形态的观察扬州大学兽医学院扬州大学兽医学院成大荣成大荣一、目的要求一、目的要求1.1.了解显微镜油镜的原理，并掌握其使用方法；了解显微镜油镜的原理，并掌握其使用方法；2.2.学习和掌握细菌抹片制备及染色方法；学习和掌握细菌抹片制备及染色方法；3.3.观察细菌的基本形态和排列方式。观察细菌的基本形态和排列方式。二、实验原理二、实验原理11、细菌为什么要染色？、细菌为什么要染色？（1）细菌细胞微小，无色而半透明，直接在普通光学显微镜下观察，只能大致见到其外貌，制成抹片和染色后，则能较清楚地显示其形态和结构；（2）由于

2、细菌细胞的结构和化学成分不同而有不同的染色反应，因此染色反应的不同可作为鉴别细菌的一种依据。22、几种常用的染色方法、几种常用的染色方法（（11）简单染色法：）简单染色法：只应用一种染料进行染色的方法；如美兰染色法（（22）复杂染色法：）复杂染色法：应用两种或两种以上的染料或再加媒染剂进行染色的方法；如革兰氏染色法、抗酸染色法、瑞氏染色法和姬姆萨染色法等。33、显微镜的一般知识、显微镜的一般知识（（11）显微镜的原理）显微镜的原理荷兰人吕文虎克(AntonyvanLeeuwenhoek，1632～1723）（（22）显微镜的构造）显微镜的构造普通生物显微镜由普通生物显微镜由33部分构成部分构成

3、••照明系统：光源和聚光器••光学放大系统：物镜和目镜••机械装置：用于固定材料和观察方便（（33）油镜的原理）油镜的原理油镜的原理示意图1.物镜；2.玻璃；3.空气；4.油介质的折射率介质玻璃空气水香柏油α溴萘折射率1.52-1.5911.331.5151.66（（44）使用显微镜的注意事项）使用显微镜的注意事项••拿显微镜时，必须用一手握住镜臂，另一手托住显微镜的镜座，使显微镜保持直立的状态，切忌用单手提拿.••将显微镜放置桌上时，务必要轻放.••显微镜的镜头必须保持清洁，必要时用拭镜纸擦拭镜头，不可使用布或一般的纸，以免损伤镜头三、实验材料三、实验材料1.1.载玻片、接种棒、酒精灯、打火

4、机、记号笔；2.2.菌种：葡萄球菌、大肠杆菌3.3.美蓝及革兰氏染色液等；4.4.显微镜、香柏油等；5.5.细菌形态与结构示教片。四、实验内容四、实验内容1.1.细菌抹片的制备细菌抹片的制备：：（1）玻片准备（2）抹片（3）干燥Sta.E.coli（4）固定四、实验内容四、实验内容1.1.细菌抹片的制备细菌抹片的制备：：（1）玻片准备：载玻片应透明、洁净而无油渍，滴上水后，能均匀展开，附着性好。如有残余油渍，可滴95％酒精2~3滴，用洁净（2）抹片纱布揩擦，然后在酒精灯外焰上轻轻拖过几次。若仍不能去除油渍，可再滴l~2l~2（3）干燥滴冰醋酸，用纱布擦净，再在酒精灯外焰上轻轻拖过。（4）固定四

5、、实验内容四、实验内容1.1.细菌抹片的制备细菌抹片的制备：：所用材料不同，抹片方法也有差异。（1）玻片准备①液体材料：如液体培养物、血液、渗出液、乳汁等，可直接用接种环取一环材料，于（2）抹片：玻片上均匀地涂布成适当的薄层.②非液体材料：如菌落、脓、粪便等，则应先用接种环取少量水置于玻片上，然后再（3）干燥挑取少量材料，在液滴中混合并均匀涂布.③组织脏器材料：可先用镊子夹持中部，然后以灭菌剪刀取一小块，夹出后将其新鲜（4）固定切面在玻片上压印(触片)或涂抹成一薄层.四、实验内容四、实验内容1.1.细菌抹片的制备细菌抹片的制备：：（1）玻片准备（2）抹片让其自然干燥，不可用火焰烤干。（3）干燥

6、：（4）固定四、实验内容四、实验内容1.1.细菌抹片的制备细菌抹片的制备：：（1）玻片准备有两类固定方法。（2）抹片①火焰固定：将抹片的抹面向上，以其背面在酒精灯外焰上来回拖过数次，略加热(以不烫手为度)进行固定。（3）干燥②化学固定：可将干燥的抹片浸入甲醇中2~3min，取出晾干；或在抹片上滴（4）固定：加数滴甲醇使其作用2~3min，自然挥发干燥。抹片固定的目的：抹片固定的目的：①除去抹片的水分，涂抹材料能更好地贴附于玻片，以免水洗时易被冲掉。②使蛋白质变性，抹片更易于着色；③可杀死抹片中的部分微生物。••必须注意：并不能杀死全部细菌，也不能完全避免在染色水洗时不将部分抹片冲脱。因此，在制

7、备烈性病原菌，特别是带芽孢的病原菌的抹片时，应严格慎重处理染色用过的残液和抹片本身，以免引起病原的散播。四、实验内容四、实验内容2.2.细菌抹片的染色细菌抹片的染色：：（1）美兰染色：Sta.E.coli（2）革兰氏染色：Sta.E.coli（3）抗酸染色（只做讲述）四、实验内容四、实验内容2.2.细菌抹片的染色细菌抹片的染色：：（1）美兰染色：原理：细菌菌体蛋白质的pI多在2.0~5.0，而环境