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时间：2020-07-28
《细胞信号通路检测 总蛋白提取 课件.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、细胞信号通路检测(一)总蛋白提取病理生理学教研室背景知识背景知识蛋白质表达水平和细胞内定位研究信号蛋白分子表达水平及分子量检测WesternBlotanalysis信号蛋白分子在细胞内定位研究IMMUNOHISTOCHEMISTRY/IMMUNOCYTOCHEMISRYIMMUNOFLUORESCENCE(IF)GREENFLUORESCENTPROTEIN(GFP,LIVECELLS)实验方法、流程细胞培养细胞总蛋白提取（本次实验内容）WB检测信号通路相关蛋白表达实验材料HepG2肝癌细胞，细胞培
2、养皿，细胞刮，RIPA裂解液，PBS，低温离心机，冰盒，EP管，移液器操作步骤弃去细胞培养基，4℃预冷的PBS清洗细胞1次留适量PBS（一般为1ml，大皿可酌情增加）刮取细胞，12000rpm4℃离心2min，去除上清液。向细胞沉淀中加入适量RIPA蛋白裂解液（含有蛋白酶抑制剂）轻吹充分混匀，放置冰上裂解30min（每隔5min涡旋混匀一次）4℃14000rpm离心10min，收集上清至新的EP管中即为蛋白样品紫外-可见光分光光度计检测蛋白浓度-20℃保存讨论为了更好的观测信号通路的活化，蛋白操作过
3、程中应注意哪些问题？为何使用WB方法可以检测信号通路的活化？
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