长春中医药大学课件.ppt

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1、第四章高效液相色谱法一、色谱法概述混合物最有效的分离、分析方法。俄国植物学家茨维特在1906年分离叶绿素，色谱原型。色谱法是一种分离技术。混合物分离过程：试样中各组分在称之为色谱分离柱中的两相间不断进行着的分配。一相固定不动，称为固定相。另一相是携带试样混合物流过固定相的流体(气体或液体)，称为流动相。（动画）1、高效液相色谱法的特性特点：高压、高效、高速、高灵敏高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。LC＜＞GC互补性液相色谱仪2、色谱基本参数与流出曲线的表征1.基线无试样通过检测器时，检测到的信号即为基线。2.保留值（1）时间表示的保留值保留时间

2、(tR)：组分从进样到柱后出现浓度极大值时所需的时间；（动画）死时间(tM)：不与固定相作用的气体(如空气)的保留时间；调整保留时间（tR＇）：tR＇=tR－tM（2）用体积表示的保留值保留体积（VR）：VR=tR×qvqv为柱出口处的载气流量，单位：mL/min。死体积（VM）：VM=tM×qv调整保留体积(VR＇)：VR＇=VR－VM3.相对保留值r21组分2与组分1调整保留值之比：r21=t´R2/t´R1=V´R2/V´R1相对保留值只与柱温和固定相性质有关，与其他色谱操作条件无关，它表示了固定相对这两种组分的选择性。4.区域宽度衡量色谱峰宽度的参数，三

3、种表示方法：（1）标准偏差()：即0.607倍峰高处色谱峰宽度的一半。（2）半峰宽(Y1/2)：色谱峰高一半处的宽度Y1/2=2.354。（3）峰底宽(Wb)：Wb=4。2.相平衡参数（1）分配系数（partitioncoefficient）K组分在固定相和流动相间发生的吸附、脱附，或溶解、挥发的过程叫做分配过程。在一定温度下，组分在两相间分配达到平衡时的浓度（单位：g/mL）比，称为分配系数，用K表示，即：分配系数是色谱分离的依据。分配系数K的讨论一定温度下，组分的分配系数K越大，出峰越慢；试样一定时，K主要取决于固定相性质；每个组份在各种固定相上的分配

4、系数K不同；选择适宜的固定相可改善分离效果；试样中的各组分具有不同的K值是分离的基础；某组分的K=0时，即不被固定相保留，最先流出。3.分配比（partitionradio）k一定温度下，组分在两相间分配达到平衡时的质量比。1.分配系数与分配比都是与组分及固定相的热力学性质有关的常数，随分离柱温度、柱压的改变而变化。2.分配系数与分配比都是衡量色谱柱对组分保留能力的参数，数值越大，该组分的保留时间越长。3.分配比可以由实验测得。分配比也称：容量因子(capacityfactor)和容量比(capacityradio)；4.容量因子与分配系数的关系式中β为相比。填

5、充柱相比：6～35；毛细管柱的相比：50～1500。容量因子越大，保留时间越长。VM为流动相体积，即柱内固定相颗粒间的空隙体积；VS为固定相体积，对不同类型色谱柱，VS的含义不同；气-液色谱柱：VS为固定液体积；气-固色谱柱：VS为吸附剂表面容量。5.分配比与保留时间的关系滞留因子（retardationfactor）：us：组分在分离柱内的线速率；u：流动相在分离柱内的线速度；滞留因子RS也可以用质量分数w表示：若组分和流动相通过长度为L的分离柱，需要的时间分别为tR和tM，则tR=tM(1+k)通过上式可直接由实验获得的保留值求出分配比。6.分离因子分离因子

6、（也称为选择性因子）也可用来衡量两物质的分离程度，用α表示。7.色谱流出曲线的数学描述色谱峰为正态分布时，色谱流出曲线上的浓度与时间的关系为当色谱峰为非正态分布时，可按正态分布函数加指数衰减函数构建关系式。色谱理论需要解决的问题？色谱理论需要解决的问题：色谱分离过程的热力学和动力学问题。影响分离及柱效的因素与提高柱效的途径，柱效与分离度的评价指标及其关系。组分保留时间为何不同？色谱峰为何变宽？组分保留时间：色谱过程的热力学因素控制；（组分和固定液的结构和性质）色谱峰变宽：色谱过程的动力学因素控制；（两相中的运动阻力，扩散）两种色谱理论：塔板理论和速率理论。塔板理

7、论的假设：(1)每一个平衡过程间隔内，平衡可以迅速达到；(2)将载气看作成脉动（间歇）过程；(3)试样沿色谱柱方向的扩散可忽略；(4)每次分配的分配系数相同。3.2.2塔板理论-柱分离效能指标1.塔板理论（platetheory）半经验理论；将色谱分离过程比拟作蒸馏过程，将连续的色谱分离过程分割成多次的平衡过程的重复。（动画）色谱柱长：L，虚拟的塔板间距离：H，色谱柱的理论塔板数：n，则三者的关系为保留时间包含死时间，在死时间内不参与分配!理论塔板数与色谱参数之间的关系为n=L/H色谱峰的方差与柱长或保留时间的关系为：2.有效塔板数和有效塔板高度单位柱长的塔板

8、数越多，表明柱效越高。用