兽药残留样品前处理技术.ppt

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1、兽药残留前处理技术Pre-treatmentTechnologyofVeterinaryDrugResidue马勤川威海德生技术检测有限公司目录contents01概述02样品预处理03提取与净化04实例分析01PART概述Introduction浓缩净化提取030201样品前处理是指样品的制备和对样品中的待测组分进行提取、净化和浓缩的过程。样品前处理的目的是消除基质干扰，保护仪器，提高检测方法的灵敏度、选择性、准确度、精密度。概述基体复杂各目标化合物性质差异大残留浓度低检测限越来越严格01020304

2、残留分析特点SAMPLETYPES兽药残留分析中，最常用的生物样品是组织样品和禽蛋，其次是奶、血液和尿液样品。样品类型肌肉中水分约占75%，蛋白质（肌浆蛋白、肌原蛋白、胶原蛋白和弹性蛋白）占19%，脂肪（中性脂肪、脂肪酸和磷脂）占2.5%，糖类占1.2%，以及一些无机盐、维生素和酶类。肌浆蛋白（肌红蛋白、糖解酶）可溶于水，肌原蛋白（肌球蛋白、肌动蛋白）溶于浓盐水，胶原蛋白和弹性蛋白（结缔组织）在上述溶剂中均不溶。动物组织禽蛋包括蛋黄和蛋清。蛋黄的含水量约50%、蛋白质16.5%、脂肪33%、糖类0.2%

3、，以及一些无机盐、维生素和酶类（淀粉酶、脂肪酶、磷酸酶、肽酶和过氧化氢酶）。蛋清含水量达88%，蛋白质10.5%和极少量的碳水化合物和脂肪。与蛋清相比较，蛋黄基本上为疏水性环境，低极性药物的残留较多。如果需要分别测定蛋黄和蛋清中的残留，最好将刚产出后的蛋分离蛋黄和蛋清，避免药物由蛋黄向蛋清扩散。禽蛋奶中还含有大量由酪蛋白或脂蛋白构成的束胶体系，当酸化或加热时，束胶结构解体，蛋白质沉淀析出。非解离性的或极性较低的药物易由血浆向奶中扩散，导致奶中残留。与血浆样品类似，奶中的药物可与蛋白结合。牛奶的含水量约8

4、7%，蛋白质（以酪蛋白为主）为3.3%，脂肪（甘油三酯）为3.7%，糖类（乳糖）为4.7%，以及一些无机盐、维生素和酶类（过氧化物酶、脂肪酶等）。奶样血液由血浆和血清组成。血浆和血清的化学成分与组织液相近，测定血浆或血清中药物浓度，比全血更能反映作用部分药浓的变化，测定方法一般也可互相通用。若血浆中含有抗凝剂对测定有影响，则应使用血清样品。通常药物在血浆中均与血浆蛋白（白蛋白、球蛋白、糖蛋白、脂蛋白）发生一定程度的结合，一些药物的蛋白结合率甚至可达90%以上。因此在萃取之前，必须将结合态的药物分离出来。

5、血样尿中药物大多呈结合状态，主要以葡萄苷酸和硫酸酯结合物存在，因此无论直接测定或萃取分离之前，都必须将结合态的药物水解，使药物游离处理。尿液的主要成分是水、尿素及盐类。在所有体液样品中，尿样最容易获得，并且样品最多，内含药物（母体药物及代谢物）浓度高；正常尿液中仅含微量蛋白质，不需要去蛋白处理。尿样02PART样品预处理SamplePretreatment常用的结合物水解的方法有酸水解和酶水解药物在体内经第二相代谢反应之后，常形成葡萄糖苷酸、硫酸酯及磷酸酯等结合物。以结合状态存在的药物多存在于尿中，但也

6、存在于肝脏、肌肉及血液中。Loremipsumdolorsitametconsecteturadipisicingelit结合物水解酸水解有的药物的结合物则必须采取较剧烈的条件，如加入3mol/L盐酸溶液后还必须煮沸1h，水解后的样品呈强酸性，必要时可用碱液调整pH后再进行萃取。酸水解通常使用无机酸（盐酸），至于加入盐酸的浓度、酸化时间以及是否需要加热等，随药物性质而异，但最终应通过实验确定。酶水解β-葡糖苷酸酶可专门水解药物的葡萄糖醛酸苷，芳基硫酸酯酶和磷酸酯酶分别水解药物的硫酸酯和磷酸酯。也可用几种

7、酶的混合物，将生物样品中药物的葡萄糖醛酸酐及硫酸酯同时水解。酶水解是专属性很强的水解结合物的方法。通常使用的水解酶是β-葡糖苷酸酶、芳基硫酸酯酶、磷酸酯酶等。蛋白质生物样品如肝脏、肾脏、血浆等含有大量的蛋白质，它们能结合药物，因此对于某些药物检测，必须先将与蛋白质结合的药物游离之后再作进一步处理。除蛋白质除蛋白过程是将蛋白质变性处理后，把与蛋白质结合的药物解离出来，离心分离出去蛋白。通常除蛋白的方法是在含蛋白样品中加入适当的沉淀剂或变性剂，使蛋白质脱水而沉淀（如有机溶剂、中性盐），有的是由于和蛋白质形成

8、不溶性盐而析出（如一些酸类：三氯乙酸、高氯酸、磷酸、苦味酸）去蛋白原理有机溶剂沉淀剂甲醇与蛋白形成絮状沉淀易于离心分离，得到澄清的上清液；乙腈与蛋白形成致密沉淀，易离心除去，沉淀效率较甲醇高。使用时应加入足量的沉淀剂，通常加入量为样品体积的1.5～2倍。酸沉淀剂常用的酸性沉淀剂有三氯乙酸和高氯酸，其它还有钨酸、钼酸、磷钨酸、磷钼酸和苦味酸等。酸性沉淀剂能同蛋白质的阳离子形成不溶性盐而沉淀，必要的条件是溶液的pH要低于蛋白的等电点。LOREM