菌种的保藏(复旦大学普通微生物学课件).ppt

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1、菌种的保藏第一节菌种的衰退和复壮一、菌种的衰退二、菌种的复壮第二节菌种的保藏一、菌种保藏的目的二、菌种保藏的原理三、菌种保藏的方法性状稳定的菌种是微生物工作最重要的基本要求，否则生产或科研都无法正常进行。影响微生物菌种稳定性的因素：a）变异；b）污染；c）死亡第一节菌种的衰退和复壮遗传性的变异是绝对的，稳定性是相对的。在微生物的基础研究和应用研究中，选育一株理想的菌株是一件艰苦的工作，而欲使菌种始终保持优良性状的遗传稳定性，便于长期使用，还需要做很多日常的工作。实际上，由于各种各样的原因，要使菌种永远不变是不可能的，菌种衰退是一种潜在的威胁。只有掌握了菌种衰退的某些规律，

2、才能采取相应的措施，尽量减少菌种的衰退或使已衰退的菌种得以复壮。一、菌种的衰退菌种衰退（degeneration）：指由于自发突变的结果，使某物种原有的一系列生物学性状发生量变或质变的现象。纯菌种自发突变突变个体传代增殖原始个体不纯菌种衰退菌种（一）菌种衰退的表现菌落和细胞形态改变：生长速度缓慢，产孢子越来越少;代谢产物生产能力下降，即出现负突变；致病菌对宿主侵染能力下降；对外界不良条件的抵抗能力下降等。（二）菌种衰退的原因基因突变－－主要原因1、有关基因发生负突变导致菌种衰退；2、表型延迟造成菌种衰退；3、质粒脱落导致菌种衰退。连续传代－－加速衰退不适宜的培养和保藏条件

3、－－加速衰退（三）菌种衰退的防止控制传代次数创造良好的培养条件利用不易衰退的细胞移种传代采用有效的菌种保藏方法讲究菌种选育技术定期进行分离纯化二、菌种的复壮狭义的复壮－－消极的措施指在菌种已经发生衰退的情况下，通过纯种分离和测定典型性状、生产性能等指标，从已衰退的群体中筛选出少数尚未退化的个体，以达到恢复原菌株固有性状的相应措施。广义的复壮－－积极的措施指在菌种的典型特征或生产性状尚未衰退前，就经常有意识地采取纯种分离和生产性状测定工作，以期从中选择到自发的正突变个体。菌种复壮的主要方法1、纯种分离法菌落纯（“菌种纯”）细胞纯（“菌株纯”）通过纯种分离,可将衰退菌种细胞群

4、体中一部分仍保持原有典型性状的单细胞分离出来,经扩大培养,就可恢复原菌株的典型性状。平板表面涂布法平板划线分离法琼脂培养基浇注法用分离小室进行单细胞分离用显微操作器进行单细胞分离菌丝尖端切割进行单细胞分离2、宿主体内复壮法对于寄生性微生物的衰退菌株，可通过接种到相应昆虫或动植物宿主体内来提高菌株的毒性。3、淘汰法将衰退菌种进行一定的处理（如药物、低温、高等），往往可以起到淘汰已衰退个体而达到复壮的目的。4、遗传育种法把退化的菌种重新进行遗传育种，从中再选出高产而不易退化的稳定性较好的生产菌种。第二节菌种的保藏菌种是重要的生物资源，研究和选择良好的菌种保藏方法具有重要的意义

5、。一、菌种保藏的目的菌种保藏的重要意义就在于尽可能保持其原有性状和活力的稳定，确保菌种不死亡、不变异、不被污染，以达到便于研究、交换和使用等诸方面的需要。二、菌种保藏的原理首先应该挑选典型菌种的优良纯种来进行保藏，最好保藏它们的休眠体，如分生孢子、芽孢等。其次应人为地创造环境条件（如：干燥、低温和缺氧），使微生物长期处于代谢不活泼、生长繁殖受抑制的休眠状态。尽可能多的采用不同的手段保藏一些比较重要的微生物菌株三、菌种保藏方法各种微生物由于遗传特性不同，因此适合采用的保藏方法也不一样。一种良好的有效保藏方法，首先应能保持原菌种的优良性状长期不变，同时还须考虑方法的通用性、操

6、作的简便性和设备的普及性。斜面低温保藏法石蜡油封藏法砂土管保藏法麸皮保藏法甘油悬液保藏法冷冻真空干燥保藏法液氮超低温保藏法宿主保藏法（一）斜面低温保藏法－－常用保藏法将菌种接种在适宜的斜面培养基上，待菌种生长完全后，置于4℃左右的冰箱中保藏，每隔一定时间（保藏期）再转接至新的斜面培养基上，生长后继续保藏，如此连续不断。此法广泛适用于各大类微生物菌种的短期保藏;此法的主要保藏措施是低温。一般可保存1～6个月左右。优点是简便易行，容易推广，存活率高；缺点是菌株仍有一定程度的代谢活动能力，保藏期短，传代次数多，菌种较容易发生变异和被污染。（二）石蜡油封藏法是在无菌条件下，将灭过

7、菌并已蒸发掉水分的液体石蜡倒入培养成熟的菌种斜面（或半固体穿刺培养物）上，石蜡油层高出斜面顶端1cm，使培养物与空气隔绝，加胶塞并用固体石蜡封口后，垂直放在室温或4℃冰箱内保藏。此法广泛适用于各大类微生物菌种的中期保藏不适用于保藏某些能分解烃类的菌种。此法的主要保藏措施是低温、阻氧。一般可保存1～2年左右。（三）砂土管保藏法一种常用的长期保藏菌种的方法，适用于产孢子的微生物及形成芽孢的细菌，对于一些对干燥敏感的细菌及酵母则不适用。砂土管法兼具低温、干燥、隔氧和无营养物等诸条件，故保藏期较长、效果较好，且微生物移接方便，经济简便