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1、扫描电镜标本制备孙纪申杨宏钊(中国医学科学院生物医学工程研究所)扫描电镜主要用以观察物休表面,可观察压力表观窗,同时由于它有很大的焦深,因此立牢较大的范围,弥补了透射式电镜对复杂的立体形体感很强。日貌观察上的不足C仇钢赦扫描电镜样品制备方法有多种,下面介绍{亘:常用的几种标本架(一)临界点千燥法3本文介绍用液体c0进行临界点千燥的困1枯界点千煤装叉结构示愈田。2,,方法c0液体太少不能浸没标本则达不到临界点.1固定:,,把样品放在缓冲液或生理盐水中干燥的目的说明耐压室温度偏高在下次实验,132,洗净后放在一务戊二醛中固定30分钟至时应在放人标本前事
2、先放进液体c0然后迅、,,:2小时(样品如果是细菌真菌要把它们低速速打开排气阀在co的迅速膨胀中使耐压室,,,离心后的沉淀混悬液滴在铜片上或涂在盖玻冷却)关闭进气阀停放l一2小时以完成。0;。2。片上)有时样品需要用50作后固定C0的置换过程这时压力约为57一65公斤/.2洗净:在缓冲液中冲洗2一3次。。平方厘米.,3脱水:10外酒精溶难中脱水,7加热:用60℃温水加热耐压室(或装自在50一,,2每步10一15分钟10外酒精数次(亦可用系动调温装置)c0的压力上升到105公斤/平。,,歹d丙酮脱水)方厘米时移开热水杯5一10分钟后可以从观.:0;。
3、4取代用10%酒精和100务醋酸戊醋察窗看到co已全部气化这时压力约为951,。(或醋酸异戊醋):1的溶液进行取代后再用公斤/平方厘米、.1。:,00外醋酸戊醋取代10一15分钟亦可用708排气在排气管口放一个热水杯这样、。,9010外的醋酸戊醋取代丙酮既可通过观察气泡的排出来控制排气速度又.5清洗:用酒精或丙酮清洗进气管路和耐可避免排气。管路由于产生干泳而造成堵塞慢,,,,压室吸干后反复l一2次放进和排出液体慢打开排气阀使压力缓慢下降这时压力室温。“。cq以清洗度应用温水杯维持在45一50℃排气速度不.62:,。液体c0置换在耐压室底部放滤纸可过
4、快一般控制在10泡/秒左右在压力低,。。数层并将预先放好标本的标本架放人耐压室于50公斤/平方厘米后排气速度可适当加快,,;“0”,,拧紧耐压室盖慢慢打开进气阀让液体CO进压力表指示为排气口无气泡产生则。,,人耐压室然后稍稍打开排气阀排出耐压室可打开耐压室取出已干燥好的标本立即用导。待,内原来的气体排出气体中的醋酸戊醋气味电胶粘于标本支持座上放人真空喷镀仪内喷,,。基本消除后再将排气阀关闭此时应通过耐压镀.co;:,室的玻璃窗观察液体是否确已浸没标本9真空喷镀生物标本大都是低导性因,,、一、架(即液体cq约占耐压室的1/2一2/3如果此必须在标本表
5、面喷涂一薄层uAuAaP1983年第5期生物学通报一。。o,Rnd合金等亦可用碳和金双重喷镀喷镀Kath发明了一种简易可靠的冷冻干燥法,:设备中要有旋转倾斜的样品台喷镀时样品台介绍如下。,、、、、要以一定的速度旋转(每分针数十到数百转)标本固定和洗涤后用,o夕。5090。,,。啧镀后即可用扫描电镜观察在低倍时10一100多乙睛脱水每步20分钟然后把标本放,。,。Zokv就够了高倍时以20一斗okv为好加速在铝制容器内(大约lml)在标本上放人乙睛,。,电压过高时可以诱发引起像的重复铝制容器上罩上网罩然后放在玻璃钟罩内抽.,。,10报道指出某些表面活
6、化剂对扫描电镜真空容器内的溶剂和标本很快冷却然后冻,。,样品的充电的保护是有效的然而这些物质常结标本里冻结的乙睛在真空中升华标本被。,su-。,常不能应用于多种生物标本Katho和M干燥在干燥以后(约30分钟)标本从真空中moto制出了抗静电物质,它含有烷基苯磺酸钠。然后用导电胶粘于标本支持座上,取出放人和季铁盐(1:2,可应用于多种扫描电镜标本。,。)真空喷镀仪喷镀用扫描电镜观察1,atoatsuoto标本在0多酒精中脱水后浸人10务抗静电Kh和Mm发明了一种新的冷冻,物质的酒精(或醋酸戊醋)溶液中10一60分钟干燥法,他们把固定和水洗以后的标本
7、用50另。,一然后进行临界点干燥乙腊水溶液处理30分钟再用液体氟里昂13,食临界点千燥和喷溅金属技术广泛应用于生冷冻然后移人金属块内(金属块上半用黄铜物标本的扫描电。,,镜观察虽然它们是非常好的制成下半用铝制成中间由聚四氟乙烯垫片相,。用临界点干燥时标,。技术但是也有某些缺陷连接)然后放人液氮中冷却将金属块放人钟,,。本的收缩是不能避免的而脆弱标本的热损伤罩内抽真空和干燥约60分钟加热约30分钟。收缩,,。常被喷溅金属所引起和热损伤对组织培然后取出标本喷镀金属用扫描电镜观察,养细胞的扫描电镜观察是很严重的问题可用乙腊真空干燥法是一种优良的冷冻干燥。
8、K,下法补救对生长在盖玻片上的B细胞(有法最近有人对扫描电镜样品的千燥方法作了粗糙的表面和厚的抱浆,起源于人的上皮样癌),
