一些常用试剂的配置方法.pdf

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1、实验常用试剂、缓冲液的配制方法1、1MTris-HCl□组份浓度1MTris-HClNa2HPO4，2mMKH2PO4（pH7.4，7.6，8.0）□配制量1L□配制量1L□配置方法1.称量121.1gTris置于1L烧杯中。□配置方法1.称量下列试剂，置于1L烧杯中。2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。NaCl8g3.按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。KCl0.2gpH值浓HClNa2HPO41.42g7.4约70mLKH2PO40.27g7.6约60mL2.向烧杯中加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。8.0约4

2、2mL3.滴加HCl将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定4.将溶解定容至1L。容至1L。5.高温高压灭菌后，室温保存。4.高温高压灭菌后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH注意：上述PBSBuffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中值随温度的变化差很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低补充1mMCaCl2和0.5mMMgCl2。0.03个单位。6、10M醋酸铵□组份浓度10M醋酸铵2、1.5MTris-HCl□组份浓度1.5MTris-HCl□配制量100mL（pH8.8）□配制量

3、1L□配置方法1.称量77.1g醋酸铵置于100～200mL烧杯中，加□配置方法1.称取181.7gTris置于1L烧杯中。入约30mL的去离子水搅拌溶解。2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。2.加去离子水将溶液定容至100mL。3.用浓盐酸调pH值至8.8。3.使用0.22μm滤膜过滤除菌。4.将溶液定容至1L。4.密封瓶口于室温保存。5.高温高压灭菌后，室温保存。注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的7、Tris-HCl平衡苯酚□配置方法pH值随温度的变化

4、差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约1.使用原料：大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏降低0.03个单位。便可用于分子生物学实验。但有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应避3、10×TEBuffer□组份浓度100mMTris-HCl，10mMEDTA免使用。同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须在160℃对其（pH7.4，7.6，8.0）□配制量1L进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物，这些氧化产物可引起磷酸二酯□配置方法1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。因此，苯酚的质量对DNA、1MTris-H

5、ClBuffer（pH7.4，7.6，8.0）100mLRNA的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物500mMEDTA（pH8.0）20mL学实验。2.向烧杯中加入约800mL的去离子水，均匀混合。2.操作注意：苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时3.将溶液定至1L后，高温高压灭菌。应戴手套及防护镜等。所有操作均应在通风橱中进行，与苯酚接触4.室温保存。过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。4、3M醋酸钠□组份浓度3M醋酸钠3.苯酚平衡：因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相，因（pH5.2）□配制

6、量100mL此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH值达到7.8以上，苯酚□配置方法1.称取40.8gNaOAc•3H2O置于100～200mL烧杯平衡操作方法如下：中，加入约40mL的去离子水搅拌溶解。①液化苯酚应贮存于-20℃，此时的苯酚呈现结晶状态。从2.加入冰乙酸调节pH值至5.2。冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温，然后在68℃3.加入去离子水将溶液定容至100mL。水浴中使苯酚充分溶解。4.高温高压灭菌后，室温保存。②加入羟基喹啉（8-Quinolinol）至终浓度0.1％。该化合物5、PBSBuffer□组份浓度

7、137mMNaCl，2.7mMKCl，10mM是一种还原剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂，同时因其呈黄色。有助于方便识别有机相。EDTA，50mMGlucose③加入等体积的1MTris-HCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅（质粒提取用）□配制量1L拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。□配置方法1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。④重复操作步骤③。1MTris-HCl（pH8.0）25mL⑤加入等体积的0.1MTris-HCl（pH8.0），使用磁力搅拌器0.5MEDTA（pH8.0）20mL搅拌15分钟，静置

8、使其充分分层后，除去上层水相。20％Glucose（1.11M）45mL⑥重复操作步骤⑤，稍微残留部分上层水相。dH2O910mL⑦使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。2.高温高压灭菌后，4℃保存。⑧将苯酚置于棕色