定性实验方法学验证课件.ppt

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1、定性实验的方法学验证Methodvalidationofthequalitativetest李慧源临床免疫学实验室KingmedclinicalimmunologyLabMethodvalidationofthequalitativetest验证目的:1.评价和验证各定性检测项目的准确度、精密度、灵敏度、特异性、等各项参数，满足临床检测和认可组织的要求.2.验证厂家提供的试剂参数能在本实验室得到重现.Methodvalidationofthequalitativetest验证的内容:准确度(Accuracy)精密度(Precision)诊断敏感性（sensitivity

2、ofdiagnosis）特异性（specificity）:同一项目不同检测方法或仪器的比对CUTOFF值验证Methodvalidationofthequalitativetest实施验证的时机:引进新检测项目及方法。已确立的检测方法的更新。原有的检测方法应用扩大到新的检测范畴。质控指标表明已确立的检测方法性能正随时间而改变。Methodvalidationofthequalitativetest几个重要概念及计算公式的回顾:1.诊断敏感性:将实际患病者正确诊断为阳性的百分率。计算公式为：真阳性/（真阳性+假阴性）X100%.2.特异性:指将实际无病者检测为阴性的百分率。计

3、算公式为：真阴性/(真阴性+假阳性）X100%.Methodvalidationofthequalitativetest3.Kappa检验:用与两组定性结果一致性比较.用公式计算得到一个kappa值.kappa值位于〔-1,1〕,Kappa≥075时两组结果一致性较好；0.75>Kappa≥0.4两者一致性一般；Kappa<0.4表示两者一致性很差.观察一致率P0=（A+D）/N机遇一致率Pc=(R1C1/N+R2C2/N)/N实际观察一致率=P0—Pc非机遇一致率=1-PcKappa=（P0—Pc）/（1-Pc）方法A方法B阳性阴性合计阳性ABR1阴性CDR2合计C1C2

4、NMethodvalidationofthequalitativetest一.准确度验证:1.检测已知值的参考物质室间质评材料(卫生部或者CAP)厂商提供的已赋值的参考材料分析用参考方法或决定方法定值的材料。(如dsDNA检测)2.方法比较试验：样本数为10-20个，两种方法同时测定同样的样品，用KAPPA检验方法分析两种方法检测结果一致性.(比如HBV酶免法和发光法比对)Methodvalidationofthequalitativetest二.精密度验证:1.批内精密度:同一份样本在同一批次内平行重复检测10次.然后计算均值,SD和CV.2.批间精密度:同一份样本连续检

5、测10天,每天平行检测双孔.然后计算均值,SD和CV.Note:1.用S/CO比值进行统计计算.2.最好选择临界值,或弱阳性样本.判断标准:批内CV小于15%,批间CV小于25%.Methodvalidationofthequalitativetest三.诊断敏感性:1.验证方法:取10-20份已知真阳性的样本（样本来源困难时可以酌情减少）。用常规检测方法检测，计算检测阳性的样本占样本总数的比例。2.样本来源:临床上明确诊断的阳性病人血清；厂家提供的明确为阳性的样本；PT中的阳性样本；决定性参考方法检测阳性的样本；以上阳性样本来源紧张时，可以进行稀释（如2：3，3：4这样稀

6、释）Methodvalidationofthequalitativetest四.特异性:1.验证方法：选取20份正常健康人血清（一般取自健康体检者），计算其检测阴性结果所占百分率。2.样本来源:体检样本,体检者本人填写<健康调查表>确认符合要求后即可.NOTE:部分项目在健康体检人群中阳性率也很高,此类项目特异性验证很难执行,建议引用厂家说明书.比如麻疹病毒IgG,CP-IgG,MP-IgG等一系列病毒抗体IgG.因为很难确认体检者既往是否有过感染史,而IgG抗体在体内存留时间长.因此很难收集到真正意义上的阴性样本.Methodvalidationofthequalitat

7、ivetest补充1:同一项目不同检测方法或仪器的比对适用范围:一个项目有两种以上的方法或者两台以上的仪器(包括同一型号的仪器)同时检测,需要进行一致性比对.定量检测中,报告单位不同的不需要比对首次比对选取40份(20)样本,最好阴阳性各半↓随机每8份分成一组↓两种方法(或两台仪器)每天平行检测一组样本↓将所有检测结果汇总↓Kappa检验,评价一致性Methodvalidationofthequalitativetest补充说明:关于CUTOFF值验证定量实验但是报告定性结果的才需要做CUTOFF值验证.(比如PC