基因工程的基本操作程序-2(授课用)课件.ppt

《基因工程的基本操作程序-2(授课用)课件.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、基因工程基本操作的四个步骤1、目的基因的获取2、基因表达载体的构建3、将目的基因导入受体细胞4、目的基因的检测与鉴定从基因文库中获取利用PCR技术扩增人工合成1.2基因工程的基本操作程序——基因表达载体的构建【学习目标】1.简述基因表达载体构建的目的和过程2.理解基因表达载体各组成成分的含义。3.能够准确说出原核细胞和真核细胞的基因结构异同点。难点：基因表达载体中各组成成分的含义原核细胞和真核细胞的基因结构异同点。思议【自主学习】1、编码相同数目氨基酸的蛋白质，原核细胞与真核细胞基因结构一样长吗？2、为什么要构建基因文库？直接从含有目的基因的生

2、物体内提取不行吗？3、将生物的所有DNA直接导入受体细胞不是更简便吗？如果这么做，结果会怎样？要求：1.必要的文字记录，好记性不如烂笔头；2.小组讨论按顺序发言，人人发言；展激情展示我最棒1、编码相同数目氨基酸的蛋白质，原核细胞与真核细胞基因结构一样长吗？2、为什么要构建基因文库？直接从含有目的基因的生物体内提取不行吗？3、将生物的所有DNA直接导入受体细胞不是更简便吗？如果这么做，结果会怎样？二、基因表达载体的构建——基因工程的核心1、目的：使目的基因在受体细胞中，并且可以，同时使目的基因能够。稳定存在遗传给下一代表达和发挥作用思考：作为基因

3、工程表达载体，只需含有目的基因就可以完成任务吗？为什么？2、基因表达载体的组成：复制原点+目的基因+启动子+终止子+标记基因它们各自的作用是什么?启动子：位于基因的首端的一段特殊的DNA片断，它是RNA聚合酶识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终获得蛋白质终止子：位于基因的尾端的一段特殊的DNA片断，能终止mRNA的转录标记基因的作用是为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将有目的基因的细胞筛选出来⑴用一定的_________切割质粒，使其出现一个切口，露出____________。⑵用_____________切断目的基因

4、，使其产生_________________。⑶将切下的目的基因片段插入质粒的______处，再加入适量___________，形成了一个重组DNA分子（重组质粒）限制酶黏性末端同一种限制酶的黏性末端切口DNA连接酶相同3、构建基因表达载体的过程：【温馨提示】①载体与表达载体的区别：二者都有标记基因和复制原点两部分DNA片段。表达载体在载体基础上增加了目的基因、启动子、终止子三部分结构②启动子、终止子对于目的基因表达必不可少③目的基因不能单独进入受体细胞，必需以表达载体的方式携带进去。④启动子(DNA片段)≠起始密码子(在RNA上);

5、终止子(DNA片段)≠终止密码子(在RNA上)。⑤该过程把三种工具(其中有两种工具酶)全用上了,是最核心、最关键的一步,在体外进行。1、原核细胞的基因结构非编码区非编码区编码区编码区上游编码区下游与RNA聚合酶结合位点启动子终止子启动子：位于基因的首端的一段特殊的DNA片断，它是RNA聚合酶识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终获得蛋白质终止子：位于基因的尾端的一段特殊的DNA片断，能终止mRNA的转录【补充资料】1、原核细胞的基因结构非编码区非编码区编码区编码区上游编码区下游与RNA聚合酶结合位点启动子终止子RNA聚合酶

6、:能够识别启动子上结合位点的一种蛋白质.【补充资料】RNA聚合酶能够识别调控序列中的结合位点，并与其结合。转录开始后，RNA聚合酶沿DNA分子移动，并以DNA分子的一条链为模板合成RNA。转录完毕后，RNA链释放出来，紧接着RNA聚合酶也从DNA模板链上脱落下来。【补充资料】①不能转录为信使RNA，不能编码蛋白质。：能转录相应的信使RNA，能编码蛋白质编码区非编码区原核细胞的基因结构②有调控遗传信息表达的核苷酸序列.包括启动子和终止子非编码区非编码区编码区编码区上游编码区下游启动子终止子【补充资料】2、真核细胞的基因结构编码区非编码区非编码区与

7、RNA聚合酶结合位点内含子外显子能够编码蛋白质的序列叫做外显子不能够编码蛋白质的序列叫做内含子启动子终止子编码区上游编码区下游内含子：外显子：【补充资料】真核细胞的基因结构编码区非编码区外显子：能编码蛋白质的序列内含子：不能编码蛋白质的序列：有调控作用的核苷酸序列，包括位于编码区上游的RNA聚合酶结合位点（启动子）。非编码序列：包括非编码区和内含子原核细胞真核细胞不同点编码区是_____的编码区是间隔的、_____的相同点都由能够编码蛋白质的______和具有调控作用的______区组成的3、原核细胞与真核细胞的基因结构比较思考编码相同数目氨基

8、酸的蛋白质，原核细胞与真核细胞基因结构一样长吗？连续不连续编码区非编码检文库类型cDNA文库基因组文库文库大小小大基因中启动子无有基因中内含子无有基因