通过对LB培养基的配制课件.ppt

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1、2021/8/14三峡大学李晓玲编写与制作1分子生物学实验三峡大学化学与生命科学学院湖北省生物学实验教学示范中心2014年3月2021/8/14三峡大学李晓玲编写与制作2实验内容实验一实验准备及培养基的制备与灭菌实验二质粒DNA的提取实验三琼脂糖凝胶电泳技术检测质粒DNA实验四大肠杆菌感受态细胞的制备及转化实验五DNA重组（连接反应）实验六植物DNA的提取及琼脂糖凝胶电泳检测实验七PCR基因扩增22021/8/14三峡大学李晓玲编写与制作31.实验准备：器皿清洗、试剂配制、灭菌分装、取用保存2.离心机的使用①打开离心

2、机电源开关，进入待机状态。②选择合适的转头③离心管平衡误差应在0.1克以内。④选择离心参数：主要掌握离心机、微量移液器及高压灭菌锅的使用机及实验操作注意事项实验一实验准备及培养基制备与灭菌【实验准备内容】【实验目的】2021/8/14三峡大学李晓玲编写与制作4⑤将平衡好的离心管对称放入转头内。盖好转头盖子拧紧螺丝。⑥按下离心机盖门，如盖门未盖牢，离心机将不能启动。⑦按START键，开始离心。离心开始后（特别是高速离心时）应等离心速度达到所设的速度时才能离开，一旦发现离心机有异常（如不平衡而导致机器明显震动，或噪音很大）

3、，应立即按STOP键，必要时直接按电源开关切断电源，停止继续离心，并找出原因。⑧机器如发现故障，请及时与有关人员联系。⑨使用结束后请清洁转头和离心机腔，不要关闭离心机盖，利于湿气蒸发。⑩使用结束后必须登记，注明使用情况。2021/8/14三峡大学李晓玲编写与制作5离心机的摆放位置2021/8/14三峡大学李晓玲编写与制作63.移液器的使用移液器是生化与分子生物学实验室常用的小件精密设备，移液器能否正确是用，直接关系到实验的准确性与重复性，同时关系到移液器的使用寿命。移液器由联系可调的机械装置和可替换的吸头组成，不同型号的

4、移液器吸头有所不同，实验室常用的移液器根据最大吸用量有20ul,200ul,1ml等规格。微量移液器的操作步骤：①将微量移液器装上吸头（不同规格的移液器用不同的吸头）②将微量移液器按钮轻轻压至第一停点；2021/8/14三峡大学李晓玲编写与制作7③垂直握持微量移液器，使吸嘴浸入液样面下几毫米，千万不要将吸嘴直接插到液体底部；④缓慢、平稳地松开控制按钮，吸上样液。否则液体进入吸嘴太快，导致液体倒吸入移液器内部，或吸入体积减少；⑤等一秒钟后将吸嘴提离液面⑥平稳地把按钮压到第一停点，再把按钮压至第二停点以排出剩余液体；⑦提起微

5、量移液器，使吸嘴在容器壁擦过；⑧然后按吸嘴弹射器除去吸嘴。2021/8/14三峡大学李晓玲编写与制作82021/8/14三峡大学李晓玲编写与制作9量液操作注意事项a.连续可调移液器的取用体积调节要轻缓，严禁超过最大或最小量程；b.在移液器吸头中含有液体时禁止将移液器水平放置，平时不用时置移液器于架上；c.吸取液体时，动作应轻缓，防止液体随气流进入移液器的上部；d.在吸取不同的液体时，要更换吸头；e.移液器要进行定期校准，一般由专业人员来进行。2021/8/14三峡大学李晓玲编写与制作104.手提式高压蒸气灭菌锅的使用及注

6、意事项①首先将内层锅取出，再向外层锅内加入适量的水，使水面与三角搁架相平为宜。切物忘记加水，同时加水量不可过少，以防灭菌锅烧干而引起炸裂事故。②放入内层锅，并装入待灭菌物品。注意不要装得太挤，以免妨碍蒸气流通而影响灭菌效果。三角瓶与试管口端均不要与桶壁接触，以免冷凝水淋湿包口的纸而透入棉塞。③加盖，并将盖上的排气软管插入内层锅的排气槽内。再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺旋松紧一致，务使漏气。2021/8/14三峡大学李晓玲编写与制作11④用电加热，并同时打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的空气。待冷空气完全排尽

7、后，关上排气阀，让锅内的温度随蒸气压力增加而逐渐上升。当锅内压力升到所需压力时，控制热源，维持压力至所需时间。本实验用0.11MPa,121.5℃,20min灭菌。灭菌的主要因素是温度而不是压力。因此锅内冷空气必须完全排尽，才能关上排气阀，维持所需压力。⑤灭菌所需时间到后，切断电源，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降至“0”时，打开排气阀，旋松螺栓。打开盖子，取出灭菌物品。压力一定要降到“0”时，才能打开排气阀，开盖取物。否则就会因锅内压力突然下降，使容器内的培养基由于内外压力不平衡而冲出瓶口，造成棉塞沾染培养基而

8、发生污染，甚至灼伤使用者。2021/8/14三峡大学李晓玲编写与制作12⑥将取出的灭菌培养基放入37℃温箱培养24小时，经检查若无杂菌生长，即可待用。5.实验室安全与卫生6.分组：5人一大组，2～3人一小组，一个实验桌1套移液枪7.准备：每组蓝枪头和黄枪头各1盒，全班另加2包，EP管1盒或1包，30ml离心管12个，