生醫所核酸定序服務.doc

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1、DNASequencingService核酸定序服務簡介核酸定序儀(ABIPRISM3730DNAAnalyzer)是一自動化、高工作效率的毛細管電泳系統，每一次反應可同時偵測96組螢光標定的DNA片段樣品。利用毛細管電泳技術將這些長短不一的DNA片段分離，並以CCD偵測每一片段不同螢光的組合來判讀DNA鹽基的排列順序。DNA定序樣品種類及濃度要求:因分析儀器為毛細管系統，樣品請務必以分光光度儀定量，濃度過高或過少的樣品都會導致分析結果不良，甚至堵塞毛細管。注意:若待分析的DNA定序樣品分子量過大或是有特殊結構(如GC-rich)，請於第一次送樣前先與

2、核酸定序室工作人員林岱枏聯絡，TEL：27899527。並在申請單上註明。樣品規定請見下表:DNAtypeConcentrationrequired(Usecore’sprimer)Concentrationrequired(Useyourprimer)Totalvolume10μl(DNAonly)*12μl(DNA+Primer)Plasmid/dsDNA50-75ng/μl(Total0.5μg)50-75ng/μl,(Total0.5μg)Single-strandedDNA25-50ng/μl25-50ng/μlPCRproduct1~3ng

3、/100bp1~3ng/100bpYourcustomprimer-3.2μM~9.6μM(3.2-9.6pmol/μl),體積:2μl.*備註:不論是否使用公儀提供的primer,請提供10μlDNA,您如要添加您自己的primer,請放入濃度3.2-9.6μM,體積2μl(或約40ng)即可!因此總體積是12μl.核心實驗室提供的primer:我們也提供您五種可選擇的primer:PrimersupportedbyCoreFacilityLaboratoryPrimertypePrimersequence21M13ForwardPrimer5’GT

4、TTTCCCAGTCACGAC3’(17mer)21M13ReversePrimer5’CAGGAAACAGCTATGAC3’(17mer)T7Primer5’TAATACGACTCACTATAGGG3’(20mer)SP6Primer5’TATTTAGGTGACACTATAG3’(19mer)T7TerminatorPrimer5’GCTAGTTATTGCTCAGCGG3’(19mer)T3Primer5’CCATTAACCCTCACTAAAGG3’(20mer)如您點選核心實驗室所提供的primer時，建議您盡量將使用同種類primer的樣品連續排

5、列，以加速實驗室人員作業。製備模板DNA及送樣注意事項：1.樣品DNA以Nuclease-freewaterorddH2O回溶後使用(不建議將樣品DNA溶於TEbuffer或是含有EDTA等抑制物之溶劑內。)2.DNA純度a.不能有鹽類、蛋白質、RNA或是一些Detergent(如TritonX-100或SDS等)的殘留。b.不論是PlasmidDNA或PCR產物必須以電泳膠確認其純度及是否為單一片段產物。請經過純化步驟再送件。c.使用分光光度儀進行OD260/OD280之測定，一般建議之比值需介於1.6-1.8之範圍。3.第一次使用您個人的Prime

6、r定序時，請先以實驗室PCR機器作反應並跑膠，確認該primer可正確的黏合於模板DNA，且為單一產物(建議primerTm=52°C~55°C)。若有其他特殊PCR條件也請在申請單上加以註明。4.檢體命名及排放原則命名部分：·檢體命名因為系統轉檔，相容性只能14個字元；檢體命名時不可以重複。·檢體命名可使用字元如下：數字：1234567890英文字母：ABCDEFGHIJKLMNOPQRSTUVWXYZabcdefghIjklmnopqrstuvwxyz符號：-和_可接受。其他特殊符號(包括空格)請勿使用。檢體排放：·需"添加primer"之檢體，請

7、將同一種primer排放一起。