DNA重组技术的基本工具张敏).ppt

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1、知识回顾1、限制性核酸内切酶：准确切割DNA；DNA连接酶：将DNA片段再连接起来；运载体：运输工具，将体外重组好的DNA导入受体细胞。基因工程需要的工具有限制酶、DNA连接酶和运载体；需要的工具酶是限制酶、DNA连接酶。2、限制性核酸内切酶又称限制酶，其主要从原核生物中分离出来，能够识别特定的核苷酸序列，并在特定的部位进行切割。其作用部位为两个核苷酸之间的磷酸二酯键，形成黏性末端和平末端。3、DNA连接酶是将DNA片段连接起来，恢复被限制酶切割开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。根据酶的来源不同，可分为从大肠杆菌中分离出来的E·coliDNA连接酶和从T4

2、噬菌体中分离出来的T4DNA连接酶，前者只能连接黏性末端，后者既可以连接黏性末端也可以连接平末端，但连接平末端的效率比较低。4、将外源（目的）基因送入受体细胞的载体有质粒、λ噬菌体的衍生物、动植物病毒，常用质粒作为运载体，具有以下特点：（1）能自我复制（2）具有一个或多个限制酶切割位点，便于外源基因插入（3）具有标记基因，可以鉴定目的基因是否进入受体细胞。专题一　基因工程1.1DNA重组技术的基本工具学习目标1、简述DNA重组技术所需三种基本工具的作用2、总结基因工程运载体需要具备的条件3、认同基因工程的诞生和发展离不开理论研究和技术创新知识回顾1、基因

3、工程别名基因拼接技术或DNA重组技术。2、基因工程需要的工具有限制酶、DNA连接酶和运载体；需要的工具酶是限制酶、DNA连接酶3、限制性核酸内切酶作用：切割目的基因，切割运载体；DNA连接酶：连接DNA片段，形成磷酸二酯键；运载体：将外源基因导入受体细胞合作探究展示点评1、2、（1）②2、（2）②2、（3）⑤反思总结一组二组三组四组五组六组基因工程的概念：基因工程，又叫DNA重组技术。通俗的说，就是按照人们的意愿，把一种生物的某种基因提取出来，加以修饰改造，然后放到另一种生物的细胞里，定向地改造生物的遗传特性。基因工程的别名操作环境操作对象操作水平结果定

4、向改造生物性状DNA重组技术生物体外基因DNA分子水平一、限制性核酸内切酶——“分子手术刀”1名称来源：限制性核酸内切酶，又称限制酶主要从原核生物中分离纯化。2作用特点：识别特定核苷酸序列，使每条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。3作用结果：识产生黏性末端或平末端。思考：限制酶在于原核生物中的作用？EcoRI（在G和A之间切割）Smal（在G和C之间切割）黏性末端平末端同一种限制酶切割后形成的两个末端是什么关系？反向重复序列练习以下是四种不同限制酶切割形成的DNA片段：…CTGCA  (2)…AC  (3)GC…（4）…G…G…TGCG……C

5、TTAA(5)G… (6)…GC(7)GT…  (8)AATTC…ACGTC…     …CG       CA…   G…请用DNA连接酶将它们连接起来:____和____能连接;____和____能连接;____和____能连接;____和____能连接。2和7；3和6；4和8；1和5…GAATTCCGTAGAATTCGGATT……CTTCATGAATTCCCTAA……GAAGTACTTAAGGGATT……CTTAAGGCATCTTAAGCCTAA…CTTCATGAATTCCCTAA…GAAGTACTTAAGGGATT…GGCATCTTAAAATTC

6、CGTAG含目的基因的DNA片段运载体DNA片段重组DNA分子片段EcoRIEcoRI模拟制作二、“分子缝合针”——DNA连接酶1种类：⑴E·coliDNA连接酶⑵T4DNA连接酶2作用：连接DNA片段，形成磷酸二酯键3作用原理：催化磷酸二酯键形成3.比较：DNA连接酶与DNA聚合酶DNA聚合酶DNA连接酶区别1区别2相同点1)只能将单个核苷酸连接到已有的核酸片段上，形成磷酸二酯键形成磷酸二酯键1)在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键2)以一条DNA链为模板，将单个核苷酸通过磷酸二酯键连接成一条互补的DNA链2)将DNA双链上的两个缺口同时连接起来，不需要

7、模板三、“分子运输车”——载体1载体需要的条件：(1)能在宿主细胞内自我复制并稳定存留（2）具多个限制酶切点，便于连接多个外源基因（3）具标记基因，便于检测是否导入受体细胞2常用运载体：⑴细菌的质粒⑵λ噬菌体衍生物或某些动植物病毒。常用的载体：质粒能复制并带着插入的目的基因一起复制有切割位点有标记基因的存在，可用含氨苄青霉素的培养基鉴别一、基因工程的概念.二、DNA重组技术的基本工具1.限制性核酸内切酶---“分子手术刀”2.DNA连接酶---“分子缝合针”3.运载体——“分子运输车”本课小结：分类作用来源作用特点结果种类作用特点条件