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《行业标准：GB 5009.212-2016 食品安全国家标准 贝类中腹泻性贝类毒素的测定.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、中华人民共和国国家标准GB5009.212—2016食品安全国家标准贝类中腹泻性贝类毒素的测定2016-12-23发布2017-06-23实施中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会发布国家食品药品监督管理总局GB5009.212—2016前言本标准代替GB/T5009.212—2008《贝类中腹泻性贝类毒素的测定》、SC/T3024—2004《腹泻性贝类毒素的测定生物法》、SN/T2269—2009《进出口贝肉中大田软海绵酸的检测液相色谱-串联质谱法》、SN/T2131.2—2010《进出口贝类腹泻性贝类毒素检验方法第2部分:小鼠生物法》、SN/T1996—2007《
2、贝类中腹泻性贝类毒素检验方法酶联免疫吸附法》、SN/T2131.1—2008《进出口贝类腹泻性贝类毒素检测方法第1部分:荧光磷酸酶抑制法》。本标准与GB/T5009.212—2008相比,主要变化如下:———标准名称修改为“食品安全国家标准贝类中腹泻性贝类毒素的测定”;———增加了酶联免疫吸附法;———增加了液相色谱-串联质谱法。ⅠGB5009.212—2016食品安全国家标准贝类中腹泻性贝类毒素的测定1范围本标准规定了贝类中腹泻性贝类毒素测定的小鼠生物法,酶联免疫吸附法和液相色谱-串联质谱法。本标准中小鼠生物法和酶联免疫吸附法适用于贝类及其制品中腹泻性贝类毒素的测定
3、,液相色谱-串联质谱法适用于贝类可食部分及其制品(不包括盐渍制品)中腹泻性贝类毒素大田软海绵酸(OA)、鳍藻毒素-1(DTX-1)和鳍藻毒素-2(DTX-2)的测定。小鼠生物法2原理用丙酮提取贝类中腹泻性贝类毒素(DSP),经无水乙醚分配,减压蒸干后,再以含1%吐温-60的生理盐水为分散介质,制成DSP混悬液。将该混悬液注射入小鼠腹腔,观察小鼠存活情况,计算其毒力。3试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。3.1试剂3.1.1丙酮(C3H6O)。3.1.2无水乙醚(C4H10O)。3.1.3吐温-60(C64H126O26)
4、。3.1.4氯化钠(NaCl)。3.2试剂配制3.2.1氯化钠溶液(0.85%):称取0.85gNaCl,加水溶解并定容至100mL。3.2.2吐温-60(1%):称取1.0g吐温-60,用氯化钠溶液(0.85%)溶解并定容至100mL。3.3材料3.3.1小鼠:体重为16g~20g的健康ICR品系雄性小鼠。3.3.2金属筛网:孔径约2mm。4仪器和设备4.1旋转蒸发器。1GB5009.212—20164.2均质器。4.3天平:感量为0.1g。5分析步骤注:为避免毒素的危害,应戴手套进行操作。移液管及移液器吸头等用过的器材、废弃的提取液等应在次氯酸钠溶液(5%)浸泡1
5、h以上以使毒素分解。对于动物实验过程中产生的污水、废弃物及动物尸体处理,应参照GB14925执行。5.1样品采集采取足够的贝类样品个数,并使贝肉达400g以上。远离实验室不能及时送检的样品,除了在常温下品质不会发生变化的,应将样品置于保温盒中冷冻送检,或采取必要措施保证其处于低温状态(0℃~10℃)送检。如为带壳样品,应开壳,去除水分后冷冻送检。5.2试样制备5.2.1生鲜带壳样品用清水彻底洗净贝类样品外表,切断闭壳肌,开壳,用清水淋洗内部去除泥沙及其他异物,取出贝肉。严禁以加热或药物方法开壳。注意不要破坏闭壳肌以外的组织,尤其是中肠腺(中肠腺又称消化盲囊,组织呈暗绿
6、色或褐绿色)。将去壳贝肉置于孔径约2mm的金属筛网上,沥水5min。将贝肉剪碎。5.2.2冷冻样品在室温下使冷冻样品融化呈半冷冻状态。带壳冷冻的样品按5.2.1方法清洗、开壳、淋洗取肉,除去贝肉外部附着的冰片,抹去水分。将贝肉剪碎。5.3试样提取称取200g剪碎的贝肉试样置于均质杯中,按体积比加3倍量丙酮后均质2min以上。将均质好的物质倒入布氏漏斗中抽滤,收集滤液。分别用残渣2倍量的丙酮再清洗残渣两次,滤液与上述滤液合并。将滤液移入500mL的圆底烧瓶中,56℃±1℃下,减压浓缩去除丙酮直至在液体表面分离出油状物。用100mL~200mL无水乙醚溶解油状物,倒入分液
7、漏斗内,再用少量无水乙醚清洗圆底烧瓶,合并倒入分液漏斗内,以少量的水洗下粘壁部分,轻轻振荡(不能生成乳浊液),静置分层后去除水层(下层)。用相当乙醚半量的水洗乙醚层两次,去除水层,再将乙醚层移入250mL或500mL的圆底烧瓶中,于35℃±1℃减压浓缩去除乙醚。用少量无水乙醚将浓缩物移入50mL或100mL圆底烧瓶中,再次减压浓缩去除乙醚。用1%吐温-60的生理盐水将全部浓缩物转移至刻度试管中稀释到10mL,充分振摇,制成均匀混悬液。1mL该混悬液相当于20g试样,以此混悬液为试验原液。以试验原液注射小鼠,当24h内2只或3只小鼠死亡时,需振荡试验原
