细胞生物学实验指导讲义.doc

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1、实验一细胞的基本形态结构的观察实验原理与目的（1）通过观察动、植物细胞，了解细胞形态的多样性并掌握光镜下细胞的基本形态结构。（2）初步掌握临时制片技术和显微绘图的方法。实验原理细胞是生命活动的基本结构单位和功能单位。构成人体或其他高等动物或植物的细胞种类繁多，形态各异。细胞的形态都与它们的功能相适应。如具有运输O2和CO2功能的红细胞为双凹盘状；具有感受刺激与传导功能的神经细胞呈星芒形，附有长短不等的树枝状突起；上皮细胞是柱形或扁平形；巨噬细胞则呈不规则形状，并能伸出伪足，以利于为执行吞噬和消灭外源的病原微生物的功能。虽然细胞在形态上多种多样、大小

2、不同，但却具有共同的基本结构特点，即都是由细胞膜（cellmembrane）、细胞质(cytoplasm)和细胞核(nucleus)组成。实验用品1．器具：显微镜、载玻片、盖玻片、推片、吸管、镊子、牙签、擦镜纸、吸水纸、小剪刀。2．材料：洋葱、人口腔上皮细胞、鸡血液、人血细胞涂片、蟾蜍血细胞涂片。3．试剂：2%碘液、Giemsa染液。试剂配制1．2%碘液：称取碘片2g，碘化钾5g，蒸馏水100ml混匀溶解即可。2．吉姆萨(Giemsa)染液：吉姆萨粉(Giemsastain)l.0g甘油(AR)66ml甲醇(AR)66ml将Giemsa粉放入研钵中

3、，先加入少量甘油，研磨至无颗粒为止，然后再将全部甘油倒入，放56℃温箱中2h后，加入甲醇，将配制好的染液密封保存棕色瓶内(最好于0~4℃保存)。内容与方法一、洋葱鳞茎表皮细胞制片与观察：1.临时制片：取一擦净的载玻片，在玻片中央滴一滴2%的碘液，将洋葱茎用小刀分为几块，取一块肉质鳞叶，用镊子在其表面轻轻撕下一小块膜质表皮，再用剪刀剪成3～4mm2的小块，置于载玻片的染液中铺平，染色2～3分钟，盖上盖玻片，用吸水纸吸去盖玻片周围多余的染液。2.观察：将标本置于低倍镜下观察，可见许多长柱状排列整齐、彼此相连的细胞，选择其中较典型的细胞移至视野中央，然后

4、换成高倍镜观察以下结构：1）细胞壁：在每两个细胞相连处，可看到二层壁状结构，是相邻细胞各自的细胞壁，有纤维素构成。细胞膜紧贴在细胞壁内侧，不易看到。2）细胞核：呈椭圆形，位于中央，被染成黄色，成熟的细胞由于液泡的挤压，核位于质膜边缘。细胞核一般有1～2个折光较强并染成黄色的核仁。（3）细胞质：是细胞膜以内，细胞核以外的物质，染色较浅，有1至数个液泡及微细颗粒（图1-1）。二、人口腔粘膜上皮细胞制片与观察：1.临时制片：在一张擦净的载玻片中央滴一滴2%的碘液，取一根牙签，用其粗端在自己口腔中的脸颊上刮几下，将其刮下的粘膜上皮细胞涂布在碘液中，染色2～

5、3分钟，盖上盖玻片，用吸水纸吸去盖玻片周围多余的染液。色2～3分钟，盖上盖玻片，用吸水纸吸去盖玻片周围多余的染液。2.观察：将制好的玻片标本置于低倍镜下观察，可见细胞被染成黄色，成群或分散存在。由于该细胞体积较小，着色较淡，观察时应稍降低视野中的亮度，选择较分散且轮廓清楚的细胞移至视野中央，换成高倍镜观察以下结构。1）细胞膜：是包围在细胞最外层的膜状结构，细胞呈扁平不规则的类圆形，细胞膜有些地方出现皱褶。2）细胞核：圆形或椭圆形的细胞核呈深黄色位于细胞中央，核中有时可见一致密的结构，即为核仁。3）细胞质：是细胞膜与细胞核之间染色较浅的物质（图1–2

6、；图1-3）。2.观察：将已经染好的血涂片标本（肉眼可见血膜呈粉红色）放置在低倍镜下，检查整个血涂片，选择细胞均匀分布、较少重叠的区域，然后转换高倍镜下仔细观察，在人的血涂片上红细胞数目多、体积小、呈圆饼状，无细胞核（图1-4），胞质呈粉红色；白细胞比例较小，寻找较困难，但胞体较大，细胞核明显，形态多样，呈兰紫色。鸡的血细胞、蛙的血细胞的形态与人类有很大不同，在鸡或蛙血的红细胞涂片中，可见红细胞呈卵圆形，并且有椭圆形的细胞核（图1-5）。图1-4人血红细胞的形态??图1-5鸡血红细胞的形态作业与思考题1.绘制高倍镜下洋葱鳞茎表皮细胞、人口腔黏膜上皮

7、细胞图，并注明各部分结构的名称。2.生物绘图的基本要求是什么？实验二细胞大小的测量实验目的学习显微测量方法实验原理应用显微镜的成像原理，同时借助显微镜的镜台测微尺和目镜测微尺，两尺配合使用，进行测量和运算，得出细胞的大小。(目镜测微尺测量倍率比照表)实验材料、用品材料：人口腔上皮细胞,鸡血红细胞、洋葱鳞叶表皮细胞。仪器(请参看仪器图库)：测微尺、显微镜。物镜测微尺目镜测微尺实验步骤(一)测微尺的使用操作1.卸下目镜的上透镜，将目镜测微尺有刻度一面向下装在目镜镜面上，再旋上目镜的上透镜。2.将镜台测微尺有刻度一面朝上放在载物台上夹好，使测微尺刻度位于

8、视野中央。调焦至看清镜台测微尺的刻度。3.小心移动镜台测微尺和目镜测微尺(如目镜测微尺刻度模糊，可转动目镜上透镜进行调焦)