细胞生物学实验指导

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1、.细胞生物学实验指导细胞生物教研室 ..目录实验一动物细胞的基本形态观察和显微测量………………………………1实验二线粒体的活体染色及电镜照片观察…………………………………4实验三液泡系的活体染色及电镜照片观察…………………………………6实验四细胞生理活动的观察…………………………………………………7实验五细胞组分的化学反应…………………………………………………11实验六细胞核与线粒体的分级分离…………………………………………14实验七细胞融合………………………………………………………………17实验八培养细胞的形态观察和计数…………………………………………19实验

2、九细胞的原代和传代培养………………………………………………23实验十细胞中微丝的染色及微丝与细胞形态的实验观察…………………25实验十一应用细胞融合技术制备染色体提前凝集标本……………………27实验十二放线菌素D诱导HL60细胞凋亡的实验观察……………………29实验十三MAPK信号通路与乳腺癌细胞增殖及可能机制的探索性实验…36 ..实验一动物细胞的基本形态观察和显微测量【实验目的】制备不同细胞的临时制片，观察、了解细胞的基本形态，学会使用测微尺，通过测量对红细胞的进化进行分析。【实验用品】一、材料和标本蟾蜍一只，人血液一滴。二、器材和仪器配有目镜测微尺的显微镜

3、一台、载片十张、盖片三张、吸水纸、手术器材一套、解剖盘一个、镜台测微尺一个、小平皿一个、牙签。三、试剂1％甲苯胺兰、1％甲基兰、Ringer氏液(两栖类用)。【实验内容】一、细胞的基本形态观察(一)原理细胞的形态结构与功能相关是很多细胞的共同特点，在分化程度较高的细胞更为明显，这种合理性是生物漫长进化过程所形成的。例如：具有收缩机能的肌细胞伸展为细长形；具有感受刺激和传导冲动机能的神经细胞有长短不一的树枝状突起；游离的血细胞为圆形、椭圆形或圆饼形。不论细胞的形状如何，细胞的结构一般分为三大部分：细胞膜、细胞质和细胞核。但也有例外。例如：哺乳类红细胞成熟时细胞核消

4、失。(二)观察方法与结果1．制备蟾蜍脊髓压片观察脊髓前角运动神经细胞。取蟾蜍一只，破坏脑和脊髓，在口裂处剪去头部，除去延脑，剪开椎管，可见乳白色脊髓，取下脊髓放在平皿内，用Ringer氏液洗去血液后放在载片上，剪碎。将另一载片压在脊髓碎块上，用力挤压。将上面的载片取下即可得到压片。在压片上滴一滴甲苯胺兰染液，染色10分钟，盖上盖片，吸去多余染液。在显微镜下观察，染色较深的小细胞是神经胶质细胞。染成兰紫色的、大的、有多个突起的细胞是脊髓前角运动神经细胞，胞体呈三角形或星形，中央有一个圆形细胞核，内有一个核仁(参照照片)。2．蟾蜍骨骼肌细胞的剥离与观察剪开蟾蜍腿部皮

5、肤，剪下一小块肌肉，放在载片上，用镊子和解剖针剥离肌肉块成为肌束，继续剥离，可得到很细的肌纤维(肌细胞)。尽可能拉直肌纤维。在显微镜下观察，肌细胞为细长形，可见折光不同的横纹，每个肌细胞有多个核，分布于细胞的周边(参照照片)。3．蟾蜍肝脏压片的制备与观察剪开蟾蜍腹腔，取一小块(约2～3mm)肝放在平皿内，用Ringer氏液洗净，用镊子轻3压将肝中的血挤出。然后放在载片上，制片方法同脊髓压片。染色用甲基兰。显微镜下观察可见肝细胞核染成兰色，肝细胞紧密排列，挤成多角形(参照照片)。4．蟾蜍血涂片的制备与观察取一滴蟾蜍血液，靠近一端滴在载片上．将另一载片的一端呈45°

6、角紧贴在血滴的前缘，均匀用力向前推，使血液在载片上形成均匀的薄层。(图l一1)。晾干。显微镜观察可 ..见蟾蜍红细胞为椭球形，有核。白细胞数目少，为圆形。图1—1血涂片的制备5．人血涂片的制备与观察取人血一滴，制片方法同上。显微镜观察可见人红细胞为凹圆盘形，无核。自细胞数目少，为圆形。6．人口腔上皮细胞标本的制备与观察用牙签刮取口腔上皮细胞均匀地涂在载片上(不可反复涂沫)，滴一滴甲苯胺兰染液，染色5分钟，盖上盖片，吸去多余染液。显微镜下观察可见复盖口腔表面的上皮细胞为扁平椭圆形，中央有椭圆形核，染成兰色。二、测微尺的使用(一)原理测微尺分目镜测微尺和镜台测微尺，

7、两尺配合使用。目镜测微尺是一个放在目镜像平面上的玻璃圆片。圆片中央刻有一条直线，此线被分为若干格，每格代表的长度随不同物镜的放大倍数而异。因此，用前必须测定。镜台测微尺是在一个载片中央封固的尺，长1毫米(1000μm)，被分为100格，每格长度是10微米。(二)方法1．将镜台测微尺放在显微镜的载物台上夹好，小心转动目镜测微尺和移动镜台测微尺使两尺平行，记录镜台测微尺若干格所对应的目镜测微尺的格数(图1—2)。2．按下式求出目镜测微尺每格代表的长度目镜测微尺每格代表的长度(μm)=X10三、测量人口腔上皮细胞从显微镜载物台上取下镜台测微尺，换上人口腔上皮细胞标本，

8、测量细胞、细胞核的长短径