人 白介素10 IL-10 Elisa试剂盒检测方法原理步骤说明书.doc

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1、人IL-10定量分析酶联免疫检测试剂盒IL-10简介：人IL-10是由160个氨基酸组成4个α螺旋结构的的细胞因子，分子量为18.5kDa。在水溶液中以二聚体形式存在，分子量约为39kDa。人IL-10是个多效性的因子，能够对多种细胞起作用，主要表现为免疫抑制和免疫刺激两方面的作用，特别是在调节淋巴系和髓系的细胞功能方面扮演重要的作用。IL-10也具有单核细胞/巨噬细胞依赖、抗原刺激引起的的PBMNC和NK细胞合成其它细胞因子的抑制作用。巨噬细胞膜介导的共刺激引起的T细胞和NK细胞活化后的产物及功能也

2、可被IL-10所抑制。IL-10是单核细胞/巨噬细胞功能的强有力的调节物。IL-10作为细胞介导的免疫反应的抑制物，能够抑制像前列腺素E2、TNF-α、IL-1、IL-10和IL-8等许多引起炎症的细胞因子。IL-10能够促进可溶性TNF受体的释放和ICAM－1和B7在细胞表面的表达。IL-10还参与B细胞、柱状细胞及胸腺细胞的增殖和分化的调控。人的IL-10与鼠类的IL-10在DNA序列和氨基酸序列上高度同源，其DNA序列中一个开放的基因框与艾伯斯坦-巴尔病毒基因组上基因框BCRF1高度同源，这可能

3、在病毒感染中扮演重要角色的原因。在许多与寄生虫感染的报道中，IL－10表达也会增加，如曼森氏血吸虫感染、利什曼原虫感染、弓形虫感染、锥虫感染等。分枝杆菌的感染如麻风分枝杆菌、结核杆菌、 鸟分枝杆菌等的感染也会引起IL－10的表达升高。检测原理:本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样本中IL-10的浓度。IL-10捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标本或参考品时，其中的IL-10会与捕获抗体结合，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。当加入生物素化的抗人IL-10抗体后，抗人IL-10抗体与IL-10接

4、合，形成夹心的免疫复合物，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。随后加入辣根过氧化物酶标记的亲合素。生物素与亲合素特异性结合，亲合素连接的酶就会与夹心的免疫复合物连接起来；其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。最后加入显色剂，若样本中存在IL-10将会形成免疫复合物，辣根过氧化物酶会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入中止液后呈黄色。通过酶标仪检测，读其450nm处的OD值，IL-10浓度与OD450值之间呈正比，通过参考品绘制标准曲线，对照未知样本中OD值，即可算出标本中IL-10浓度。人定量分析酶联

5、免疫检测试剂盒组成:组分规格（96T/48T）人IL-10预包被板12条/6条样本分析缓冲液5ml/3ml标准品稀释液10ml/5ml人IL-10标准品4支/2支(冻干)人IL-10生物素化抗体10ml/5ml亲和素连接的HRP酶10ml/5ml浓缩洗涤液20×30ml/15mlTMB底物10ml/5ml中止液5ml/3ml封板胶纸3/2张说明书1份标本收集:1.标本的收集请按下列流程进行操作：A.细胞上清标本离心去除悬浮物后即可；B.血清标本应是自然凝固后，取上清，避免在冰箱中凝固血液；C.血浆标本

6、，推荐用EDTA的方法收集；D.若待测样本不能及时检测，标本收集后请分装，冻存于－20℃，避免反复冻融。2.血清标本不应添加任何防腐剂或抗凝剂；3.标本应清澈透明，检测前样本中如有悬浮物应通过离心去除；4.请勿使用溶血，高血脂或污染的标本检测，否则结果将不准确。注：正常人血清或血浆样本请用标本缓冲液做倍比稀释后再检测。注意事项:1.试剂盒请保存在2～8℃。2.浓缩洗涤液因在低温下可能有结晶，请水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。3.标准品复溶加样后，剩余部分请丢弃。4.底物请勿接触氧化剂和金属。5.

7、加样时，请及时更换枪头，避免交叉污染。6.严禁混用不同批号的试剂盒组份。7.充分混匀对保证反应结果的准性很重要，在加液后请轻轻叩击边缘以保证混匀。8.室温反应，请严格控制在25～28℃。9.洗涤过程是至关重要的，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。10.试验中标准品和样本检测时建议作双复孔。11.加样过程中避免气泡的产生。12.血清和血浆标本的检测时，检测抗体的孵育时间应适当延长。检测前准备工作:1.试剂盒自冰箱中取出后应置室温平衡20分钟；每次检测后剩余试剂请及时于2～8℃保存。2.将浓缩洗

8、涤液用双蒸水或去离子水稀释(1份加19份水)。3.标准品:加入标准品稀释液0.25ml至冻干标准品瓶中使IL-10终浓度达到2000pg/ml，室温反应，请严格控制在25～28℃。静置15分钟后轻轻混悬待彻底溶解，用标准品稀释液倍比梯度稀释后依次加入检测孔中。（标准曲线取七个点，最高浓度为2000pg/ml,标准品稀释液直接加入作为0浓度.）洗涤方法:自动洗板机或人工洗板：每孔洗涤液为300ul，注入与吸出间隔15-30秒。洗板5次。最后一次洗板完成后将