微生物限度检查法验证方案(修订版).doc

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1、审批及颁发：部门签名日期起草质量部审核质量部批准质量受权人颁发质量部会审：部门签名日期部门签名日期分发：Copy-1质量部QC一、目的为确认所采用的方法适合于该药品的细菌、霉菌、酵母菌数的测定，特制定本方案。验证过程应严格按照本方案规定的内容进行，若因特殊原因确需要变更时，应报验证委员会批准。二、范围本公司注射用水及纯化水的微生物限度检查。三、职责验证组织及人员职责组内分工姓名所属部门及岗位组内职责组长质量部QC主任负责制订方案，负责验证过程实施，收集验证数据、记录、信息，确保记载了所有验证结果并汇总形成验证报告。组员微生物检验员负责验证过程具体操作微生物检验员负

2、责验证过程具体操作QA现场监控员负责验证参数确认设备维护员负责设备维护保养验证管委会QA主任方案及报告审核质量受权人方案及报告批准四、术语无五、内容1概述：按照中国药典2010版（第二部），采用薄膜过滤法进行微生物限度检查，验证所采用的方法和条件适合于供试品的微生物限度检查。2验证项目验证项目技术标准回收率在三次独立的平行试验中，稀释剂对照组的菌数回收率K1（稀释剂对照组的平均菌落数占菌液组的平均菌落数的百分率）应均不低于70%，试验组的菌落数回收率K2(试验组的平均菌落数减去供试品对照组的平均菌落数的值占菌液组的平均菌落数的百分率)均不低于70%。3验证时间安排

3、3.12013年04月01日至2013年04月05日制订、审核及批准验证方案；3.22013年04月06日至2013年04月15日实施验证3.32013年04月16日至2013年04月20日写出验证报告4验证前提条件确认4.1相关文件及人员培训确认4.1.1相关文件确认序号文件名称编号是否为现行文件是否经过培训1水质微生物限度检查标准操作规程SOP-C-01是□否□是□否□2生物检测室标准管理规程SMP-C-01是□否□是□否□3培养基及检定菌标准管理规程SMP-C-01是□否□是□否□4集菌仪标准操作规程SOP-C-01是□否□是□否□5生物安全柜标准操作规程S

4、OP-C-01是□否□是□否□6超净工作台标准操作规程SOP-C-01是□否□是□否□结论:检查人/日期：复核人/日期：4.1.2验证人员确认序号部门姓名岗位是否经过培训1质量部QC组微生物检验员是□否□2质量部QC组微生物检验员是□否□3质量部QC组QC主任是□否□4质量部QA组现场监控是□否□5生产部工程组设备维护保养是□否□结论:检查人/日期：复核人/日期：4.2验证用仪器仪表和物品有效性确认序号名称批号/编号/型号来源/厂家是否已验证并在有效期内1压力蒸汽灭菌器是□否□2生化培养箱是□否□3霉菌培养箱是□否□4生物安全柜是□否□6超净工作台是□否□7金黄色

5、葡萄球菌是□否□8大肠埃希菌是□否□9枯草芽孢杆菌是□否□10白色念珠菌是□否□11硫乙醇酸盐流体培养基是□否□12改良马丁培养基是□否□13营养琼脂培养基是□否□14玫瑰红钠琼脂培养基是□否□15营养肉汤培养基是□否□16是□否□17是□否□18是□否□19是□否□20是□否□结论:检查人/日期：复核人/日期：4.3菌液制备4.3.1接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中或营养琼脂培养基上，30～35℃培养18～24h；接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中或改良马丁琼脂培养基上，20～25℃培养24～48h。上述培养物

6、用0.9％无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数50～100CFU的菌悬液。4.3.2接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，23～28℃培养5～7天，加入3～5ml含0.05％（ml/ml）聚山梨酯80的0.9％无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05％（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数50～100CFU的孢子溶液。4.4培养基及稀释液与供试液4.4.1培养基和稀释液的名称培养基：营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基稀释液：pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液取磷酸二氢钾3.56g、磷

7、酸氢二钠7.23g、氯化钠4.30g、蛋白胨1.0g，加水1000ml，微温溶解，滤清，分装，灭菌，即得。供试液：取纯化水10ml，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml,混匀，作为1：10的供试液；取注射用水200ml，作为供试液。4.4.2培养基灵敏度复核进行本实验之前的培养基灵敏度应复核，结果必须符合规定4.4.3稀释液的无菌性检查（结果见附录一）对稀释液进行无菌检查，14天规定温度培养后应无菌。此操作可与其它试验同时进行。检查结果：检查人/日期：复核人/日期：5验证过程5.1试验次数：验证试验应进行3次独立平行实验5.2试验组5.2.1采用薄膜过

8、滤法，过滤