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1、ICS65.020.20B61备案号:56880-2017DB32江苏省地方标准DB32/T3306—2017蓝莓组培脱毒种苗生产技术规程TechniqueregulationfortheVirus-freeplantletproductionofBlueberry2017-09-25发布2017-10-25实施江苏省质量技术监督局发布DB32/T3306—2017前言本标准按照GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分:标准的结构及编写》给出的规则编写。本标准由江苏农林职业技术学院提出并归口。本标准由江苏农林职业技术学院起草。本标准主要起草人:王永平、宗树斌、刘玉华、许建民、王珊
2、、任焕焕。IDB32/T3306—2017蓝莓组培脱毒种苗生产技术规程1范围本标准规定了蓝莓组培脱毒种苗生产技术规程的脱毒、外植体消毒、初代培养、病毒检测、继代培养、壮苗培养、驯化生根、上钵、苗期管理、生产记录等。本标准适用于全省蓝莓组培脱毒种苗的生产。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T8321(所有部分)农药合理使用准则3脱毒3.1母株选择具有品种典型特征特性、生长势强、目测无病症的优良单株。3.2热处理钝化病毒取母株的侧枝嫩梢,放入病毒钝化
3、处理器,60℃热击10s。4外植体消毒将经热处理的嫩梢剪取放入烧杯,纱布封口,自来水冲洗30min~60min,用75%乙醇浸润130s后,用无菌水洗净,再放入5%~10%的NaClO溶液中浸泡10min~15min后,用无菌水冲洗5次,再用无菌滤纸吸去表面水分,置于无菌培养皿中备用。5初代培养5.1初代培养基WPM+IBA0.05mg/L+ZT0.5mg/L,pH5.0。5.2接种在超净工作台上,用已灭菌的剪刀、镊子将消过毒的外植体均匀分成1.5cm~2.0cm的小段,每段含1芽~2芽,接种于初代培养基中,每瓶5株~10株。注明品种、编号和接种日期。5.3培养条件1DB32/T3306
4、—2017温度25℃±2℃、光照强度2000lx~3000lx、光照时间16h/d,培养100d~120d。6病毒检测抽取初代培养的蓝莓无菌苗进行蓝莓枯焦病毒(BLScV)、蓝莓急性坏死病毒(BLShV)、蓝莓鞋带病毒(BSSV)、蓝莓红环斑病毒(BRRV)、蓝莓坏死环斑病烟草环斑病毒(TRSV)、蓝莓叶片斑点病毒(BLMV)的病毒检测。检测方法采用PCR/RT-PCR。无病毒苗作为核心种苗继代扩繁培养。7继代培养7.1继代培养基WPM+NAA0.5mg/L+ZT1mg/L,pH5.0。7.2培养条件温度为25℃±2℃,光照强度1000lx~3000lx,光照时间12h/d~16h/d。
5、60d~90d培养一代,培养不超过15代。8壮苗培养8.1壮苗培养基WPM+IBA0.1mg/L,pH5.0~5.5。8.2培养条件温度为25℃±2℃,光照强度2000lx~3000lx,光照时间14h/d~16h/d。培养90d~120d。9驯化生根9.1生根设施在苗床上搭建高度50cm的小拱棚,安装喷灌设备,苗床上面铺一层无纺布,拱棚上面覆盖塑料薄膜,上盖遮阳网。9.2基质选用苔藓作为专用基质,浸泡12h甩干,湿度控制在40%~60%,塞进5×10的穴盘内。9.3炼苗将培养瓶放入温室内,上盖一层遮阳网,封口炼苗7d,然后打开遮阳网,把瓶盖拧松,再炼苗7d。9.4扦插选择生长健壮、长度
6、5cm以上、木质化程度好的组培苗进行扦插,先用清水清洗掉培养基,剪去根部膨大部分,去掉下部三分之一的叶片,在萘乙酸(NAA)1000mg/L的生根液中浸蘸1min,然后用镊子捏住插穗基部,插入塞好苔藓的穴盘内压紧。每穴1株,插入的深度为2cm~3cm。2DB32/T3306—20179.5插后管理插后立即喷水1次。15d内每天叶面喷水2次~3次,相对湿度控制在80%~100%,15d后开始生根并长出新叶,每天喷水1次,湿度控制在70%左右,30d后去掉拱棚上的遮阳网和塑料薄膜,湿度控制在60%左右。温度控制在20℃~30℃。10上钵10.1栽培容器选用13×12黑色软质营养钵为宜。10.
7、2栽培基质壤土、草碳土、腐锯末按3:1:1的体积比例混合,加入硫磺粉均匀混拌。1m3基质使用硫磺粉0.75kg~1kg将基质pH值调至4.5~5.5。10.3上钵时间须根长至3cm,苗高超过10cm时进行上钵移植。10.4上钵移植先装填基质至营养钵的1/3处,然后把苗从穴盘内取出放到营养钵的中央扶正,再把四周填满基质,稍用力压紧,使基质低于营养钵上沿2CM~3cm。每钵一株,浇透水。11苗期管理11.1温湿度管理白天温度25℃~30
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