抱子甘蓝中维生素e的提取与气相色谱法定性定量分析

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1、唐山师范学院化学系综合化学实验报告姓名：学号：同组人：系别：专业、班级：实验时间：实验项目名称：抱子甘蓝中维生素E的提取与气相色谱法定性定量分析一实验目的1．熟悉样品的制备、提取、净化、浓缩等预处理过程的操作原理和方法。2．进一步掌握气相色谱的定性与定量方法的基本原理和应用。3．掌握气相色谱仪和色谱工作站的操作方法。二实验原理（一）结构维生素E为苯并二氢吡喃醇衍生物，苯环上有一个乙酰化的酚羟基，故又称为生育酚。主要有α、β、γ和δ等多种异构体，其中以α-异构体的生理活性最强。（二）性质1．溶解性维生素E为微黄色或黄色

2、透明的粘稠液体，在无水乙醇、丙酮、乙醚、石油醚中易溶，在水中不溶。2．水解性维生素E苯环上有乙酰化的酚羟基，在酸性或碱性溶于中加热可水解生成游离生育酚，3．氧化性维生素E在无氧条件下对热稳定，加热200℃也不破坏，但对氧十分敏感，遇光、空气可被氧化。其氧化产物为α-生育醌和α-生育酚二聚体。4．紫外吸收特性本品结构中苯环上有酚羟基，故有紫外吸收，其无水乙醇在284nm的波长处有最大吸收，其吸收系数为41.0～45.0。在自然界，维生素E广泛分布于动植物油脂、蛋黄、牛奶、水果、莴苣叶等食品中，在麦胚油、玉米油、花生油、

3、棉子油中含量更丰富。抱子甘蓝是卷心菜中含维生素E最多的品种之一。本实验直接采集新鲜蔬菜样品，样品经过制备、提取、净化和浓缩等预处理过程制备成样品测试液后，用气相色谱外标法测定维生素E含量。在一定温度下，流动相载气携带样品中不同组分通过固定相并在固定相中进行分配，由于样品中不同组分在两相中具有不同的分配系数，故经反复多次的分配之后样品中各组分彼此分离而达到分离目的。实验中利用氢火焰离子化检测器进行信号检测并采用外标法进行定量分析。三．实验仪器与试剂1．仪器天美GC7900型气相色谱仪(FID)，D7900色谱工作站，马

4、弗炉，组织捣碎机，电子天平，超声波提取器，分液漏斗，氮气钢瓶。2．试剂1）有机溶剂：正己烷(分析纯)；维生素E胶丸（每粒100mg）42）层析剂：无水硫酸钠(AR)，层析中性氧化铝(ARpH值为7.5，用于分离中性物质)，60—100目红色硅藻土（一般用作从非极性的样品溶液中萃取相对极性的样品），玻璃棉。以上层析剂均在450℃马弗炉中灼烧4h后保存在干燥器中备用。四实验步骤1．样品的制备与提取称量一定质量的抱子甘蓝，经组织捣碎机绞碎后，再称取绞碎后的新鲜蔬菜样品10.0g置于于50mL烧杯中。然后向烧杯中加入10mL

5、正己烷溶剂，混匀后在超声波提取器中振荡提取10min，将提取液转移至分液漏斗中。再向烧杯中加入10mL正己烷溶剂，重复以上操作两次，合并提取液至同一分液漏斗中。提取液静置分层，放出下层水分。2．柱层析净化与浓缩在30cm(长)×lcm(内径)玻璃管层析柱底部加少许玻璃棉，按顺序分别装上无水硫酸钠约2.0cm高度，中性氧化铝和60～100目硅藻土各约1.0cm高度，轻轻敲实。先用正己烷预洗层析柱，弃掉淋洗液。然后将分液漏斗中的样品提取液全部转移至柱内进行净化，收集洗脱液于接液烧杯中。再将水分倒回分液漏斗中，加入5mL正

6、己烷溶剂振荡萃取，静置分层，放出水分，上层正己烷溶剂转移至层析柱，收集洗脱液于接液烧杯中。重复操作一次。将接液烧杯置于50℃恒温水浴中用氮气吹脱至样品体积低于10mL，精确测量样品体积，再转移至棕色瓶中，加盖密封，置于冰箱(0～4℃)中保存待测。3．测定(1)色谱操作条件色谱柱：15m×0.25um，毛细管柱；固定液：硅酮(SE-54)；柱温：265℃。检测器：氢火焰离子化检测器，温度为275℃。气化室温度：275℃。气体流量：N235mL／min；H250mL／min；空气500mL／min。进样量：1.0uL。(

7、2)GC7900的操作使用按GC7900的操作方法，开机稳定后，设置色谱仪各参数，待色谱基线平稳后即可进样测定。(3)定性测定配制20mg/mL维生素E原溶液：取维生素E胶丸10粒，将其丸壳置于烧杯中，用镊子夹住，用剪刀切开丸壳，用正己烷清洗剪刀和药丸3次，将内容物和清洗液合并于50mL容量瓶中，定容。用10μL微量进样器吸取维生素E原标准使用液1.0uL进样，绘制完整的标准色谱图。确定正己烷与维生素E的保留时间分别为min、min。(4)定量测定(1)标准系列溶液的制备：分别准确量取0.50mL，1.00mL，1.

8、50mL，2.00mL，2.50mL的20mg/mL维生素E溶液，置于10mL的容量瓶中，用正己烷定容，摇匀，即可得到浓度为1mg/ml；2.0mg/mL；3.0mg/mL；4.0mg/mL；5.0mg/mL的标准系列溶液，备用。(2)标准曲线的绘制：用微量注射器分别吸取上述标准溶液，分别注入色谱仪，每次1.0uL，测量出峰面积。根据结果绘制标