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时间:2020-06-26
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1、蚌埠学院生物与食品工程系综合实验实验名称:茶多酚的提取工艺试验一、实验目的及要求:1.了解茶多酚的性质和用途。2.了解植物天然产物的常规提取及精制方法。3.通过本实验的具体操作,掌握并熟悉茶多酚的提取与精制的方法及其操作原理和步骤。4.掌握提取精制过程中茶多酚的分析检测方法。二、实验原理:茶多酚是茶叶中多酚类物质的总称,含量约占茶叶干重量的20%-30%。茶多酚可以消除超氧阴离子和过氧化氢自由基,同时具有抑菌、杀菌,有效降低大肠对胆固醇的吸收,增强机体免疫能力等功能。目前,茶多酚被广泛的用作食品、
2、饮料、药品和化妆品的天然添加成分。(离子沉淀法)茶多酚易溶于热水,与一些金属离子形成络合物,并在一定pH值下溶解度很低。形成的金属离子络合物溶于酸溶液后,茶多酚再次转变成游离状态,再用对茶多酚有更好选择性的溶剂进行萃取、浓缩和干燥,即可得到茶多酚的纯品。三、实验仪器:电动搅拌器、离心机、pH试纸、真空干燥箱、抽虑瓶、旋转蒸发仪、真空泵、天平、紫外分光光度计、容量瓶、烧杯、量筒等。四、实验试剂及材料:氯化钠、碳酸氢钠、柠檬酸、硫酸铝、盐酸、亚硫酸氢钠、乙酸乙酯、维生素C(抗坏血酸)、磷酸氢二钠、磷酸
3、二氢钾、硫酸亚铁、酒石酸钾钠、硫酸、绿茶等五、实验内容及步骤:1.浸提1.1 预处理:粉碎干茶叶;粉碎的目的是与液体的接触面增大,使提取率增高;1.2 提取:准确称取经过预处理的干茶叶末10.00g,按照单因素实验的料液比、浸提温度、浸提时间分别搅拌浸提。过滤(用抽滤的方法)得到茶多酚提取液。用附一的方法测提取液中的茶多酚含量。单因素实验步骤:(1)将称取得10.00g茶叶末置于500ml烧杯中,加入200mL蒸馏水,在85℃下,分别提取0.5h、0.75h、1.0h、1.25h、1.5h,测提取
4、液的吸光度,绘制曲线图,找出最佳提取时间。(2)称取得10.00g茶叶末置于500ml烧杯中,加入200mL蒸馏水,在所测得的最佳提取时间下,分别在75℃、80℃、85℃、90℃、95℃下浸提,测提取液的吸光度,绘制曲线,找出最佳提取温度。(3)在上述的最佳提取温度,最佳提取时间下,分别用1:10、1:15、1:20、1:25、1:30的料液比浸提,绘制提取液的吸光度曲线,找出最佳料液比。单因素:料液比(g/L):1:101:151:201:251:30浸提温度(℃):7580859095浸提时间
5、(h):0.50.751.01.251.5取单因素实验的每个因素的最佳范围内的值,做三因素三水平的正交实验。实验结果记录在附五的实验记录表格中。通过对正交实验进行极差分析后选出最优组合,进行下一步实验。2.盐析加氯化钠于茶叶浸提液中,质量分数为2-6%,静置0.5-1.5h后过滤(可用抽滤或者离心的方式)。3.沉淀在上述滤液中加入茶叶重量2%~5%的NaHSO3,然后加入茶叶重量20%的硫酸铝饱和水溶液,加热至70℃~80℃,用15%NaHCO3溶液在快速搅拌下调节pH至5~6,此时有大量沉淀析出
6、,沉淀自然沉降一段时间后过滤,最后用等体积70℃热水洗涤沉淀三次。4.酸溶将沉淀在快速搅拌下放入到一定料酸比体积下的pH=2.5~4.5的硫酸水溶液中溶解沉淀,控制酸转溶液的pH、酸溶时间,少量胶状沉淀经抽提去除。用附一的方法测酸转溶液中茶多酚的含量单因素实验步骤:(1)将上一步骤所得的沉淀放入有40mL、pH=3.0的硫酸水溶的烧杯中,溶解,分别溶解40min、45min、50min、55min、60min,离心除去沉淀,测酸转溶液的吸光度,绘制曲线,找出最佳酸转时间。(2)取上一步骤所得的沉淀
7、放入有40mL硫酸水溶液的烧杯中,控制硫酸的pH为2.5、3.0、3.、4.0、4.5,在(1)的最佳酸转时间下,溶解,离心去除沉淀,测酸转溶液的吸光度,绘制曲线,找出最佳酸转浓度。(1)取沉淀置于有20mL、30mL、40mL、50mL、60mL硫酸水溶液的烧杯中,在上述的最佳酸转浓度、最佳酸转时间下,溶解,离心去除沉淀,测酸转溶液的吸光度,绘制曲线,找出最佳酸浓度。单因素:酸浓度(pH):2.53.03.54.04.5料酸比(g/mL):1:21:31:41:51:6酸转时间(min):404
8、5505560三因素(酸浓度;料酸比;酸转时间)取单因素实验的每个因素的最佳范围内的值,做三因素三水平的正交实验。实验结果记录在附六的实验记录表格中。通过对正交实验进行极差分析后选出最优组合,进行下一步实验。5.萃取加入茶叶重量2%-5%的NaHSO3至酸转溶液中,然后用体积0.3-1.5倍的乙酸乙酯萃取1-5次,每次萃取时间2-10min,合并萃取液。测萃余相体积,并取样分析计算萃余相中茶多酚的总量,计算茶多酚的萃取率。6.洗涤加入茶叶重量1-3%的维生素C至萃取液体积0.4倍的
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