茶多酚提取实验.doc

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1、蚌埠学院生物与食品工程系综合实验实验名称：茶多酚的提取工艺试验一、实验目的及要求：1.了解茶多酚的性质和用途。2.了解植物天然产物的常规提取及精制方法。3.通过本实验的具体操作，掌握并熟悉茶多酚的提取与精制的方法及其操作原理和步骤。4.掌握提取精制过程中茶多酚的分析检测方法。二、实验原理：茶多酚是茶叶中多酚类物质的总称，含量约占茶叶干重量的20％－30％。茶多酚可以消除超氧阴离子和过氧化氢自由基，同时具有抑菌、杀菌，有效降低大肠对胆固醇的吸收，增强机体免疫能力等功能。目前，茶多酚被广泛的用作食品、

2、饮料、药品和化妆品的天然添加成分。（离子沉淀法）茶多酚易溶于热水，与一些金属离子形成络合物，并在一定pH值下溶解度很低。形成的金属离子络合物溶于酸溶液后，茶多酚再次转变成游离状态，再用对茶多酚有更好选择性的溶剂进行萃取、浓缩和干燥，即可得到茶多酚的纯品。三、实验仪器：电动搅拌器、离心机、pH试纸、真空干燥箱、抽虑瓶、旋转蒸发仪、真空泵、天平、紫外分光光度计、容量瓶、烧杯、量筒等。四、实验试剂及材料：氯化钠、碳酸氢钠、柠檬酸、硫酸铝、盐酸、亚硫酸氢钠、乙酸乙酯、维生素C（抗坏血酸）、磷酸氢二钠、磷酸

3、二氢钾、硫酸亚铁、酒石酸钾钠、硫酸、绿茶等五、实验内容及步骤：1．浸提1.1　预处理:粉碎干茶叶;粉碎的目的是与液体的接触面增大,使提取率增高；1.2　提取:准确称取经过预处理的干茶叶末10.00g,按照单因素实验的料液比、浸提温度、浸提时间分别搅拌浸提。过滤（用抽滤的方法）得到茶多酚提取液。用附一的方法测提取液中的茶多酚含量。单因素实验步骤：（1）将称取得10.00g茶叶末置于500ml烧杯中，加入200mL蒸馏水，在85℃下，分别提取0.5h、0.75h、1.0h、1.25h、1.5h，测提取

4、液的吸光度，绘制曲线图，找出最佳提取时间。（2）称取得10.00g茶叶末置于500ml烧杯中，加入200mL蒸馏水，在所测得的最佳提取时间下，分别在75℃、80℃、85℃、90℃、95℃下浸提，测提取液的吸光度，绘制曲线，找出最佳提取温度。（3）在上述的最佳提取温度，最佳提取时间下，分别用1:10、1:15、1:20、1:25、1:30的料液比浸提，绘制提取液的吸光度曲线，找出最佳料液比。单因素：料液比(g/L)：1:101:151:201:251:30浸提温度(℃)：7580859095浸提时间

5、(h)：0.50.751.01.251.5取单因素实验的每个因素的最佳范围内的值，做三因素三水平的正交实验。实验结果记录在附五的实验记录表格中。通过对正交实验进行极差分析后选出最优组合，进行下一步实验。2．盐析加氯化钠于茶叶浸提液中，质量分数为2-6％，静置0.5-1.5h后过滤（可用抽滤或者离心的方式）。3.沉淀在上述滤液中加入茶叶重量2％～5％的NaHSO3，然后加入茶叶重量20％的硫酸铝饱和水溶液，加热至70℃～80℃，用15%NaHCO3溶液在快速搅拌下调节pH至5～6，此时有大量沉淀析出

6、，沉淀自然沉降一段时间后过滤，最后用等体积70℃热水洗涤沉淀三次。4．酸溶将沉淀在快速搅拌下放入到一定料酸比体积下的pH＝2.5~4.5的硫酸水溶液中溶解沉淀，控制酸转溶液的pH、酸溶时间，少量胶状沉淀经抽提去除。用附一的方法测酸转溶液中茶多酚的含量单因素实验步骤：（1）将上一步骤所得的沉淀放入有40mL、pH=3.0的硫酸水溶的烧杯中，溶解，分别溶解40min、45min、50min、55min、60min，离心除去沉淀，测酸转溶液的吸光度，绘制曲线，找出最佳酸转时间。（2）取上一步骤所得的沉淀

7、放入有40mL硫酸水溶液的烧杯中，控制硫酸的pH为2.5、3.0、3.、4.0、4.5，在（1）的最佳酸转时间下，溶解，离心去除沉淀，测酸转溶液的吸光度，绘制曲线，找出最佳酸转浓度。（1）取沉淀置于有20mL、30mL、40mL、50mL、60mL硫酸水溶液的烧杯中，在上述的最佳酸转浓度、最佳酸转时间下，溶解，离心去除沉淀，测酸转溶液的吸光度，绘制曲线，找出最佳酸浓度。单因素：酸浓度（pH）：2.53.03.54.04.5料酸比（g/mL）：1:21:31:41:51:6酸转时间（min）：404

8、5505560三因素（酸浓度；料酸比；酸转时间）取单因素实验的每个因素的最佳范围内的值，做三因素三水平的正交实验。实验结果记录在附六的实验记录表格中。通过对正交实验进行极差分析后选出最优组合，进行下一步实验。5．萃取加入茶叶重量2％－5％的NaHSO3至酸转溶液中，然后用体积0.3-1.5倍的乙酸乙酯萃取1－5次，每次萃取时间2-10min，合并萃取液。测萃余相体积，并取样分析计算萃余相中茶多酚的总量，计算茶多酚的萃取率。6．洗涤加入茶叶重量1-3％的维生素C至萃取液体积0.4倍的