奶粉中三聚氰胺含量测定——实验步骤.doc

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1、高效液相色谱(HPLC-UV)法测定奶粉中三聚氰胺的含量一、实验目的：测量奶粉中三聚氰胺的含量是否达标。二、仪器：高效液相色谱仪，离心机，固相萃取装置，柱温箱，紫外检测器，C18柱，超声波清洗器，pH计，电子天平，氮气吹干仪，涡旋混合器；5mL移液管1支,1mL刻度移液管1支，25mL容量瓶1个，100mL容量瓶6个，100mL烧杯1个，微量进样器一支。三、试剂：三聚氰胺标准品，1%三氯乙酸，氨水，柠檬酸，庚烷磺酸钠（色谱纯），甲醇（色谱纯），乙腈（色谱纯），二次水，甲醇水溶液（准确量取50mL甲醇和50mL水，混合备用），5%氨化甲醇（量取5mL氨

2、水和95mL甲醇混合备用），离子对缓冲溶液（准确称取2.10g柠檬酸和2.02g庚烷磺酸钠加水溶解后调节pH=3，定容至1L备用），三聚氰胺储备液（准确称取100mg三聚氰胺，在100mL容量瓶中用甲醇水溶液定容），净化柱（固相萃取柱，基质为苯磺酸化的聚苯乙烯），氮气。四、实验步骤：1.样品预处理：准确称取2g样品，用10mL1%三氯乙酸溶解后转移至25ml容量瓶中，乙腈定容。超声提取10分钟后离心，干过滤。用5mL移液管准确移取5mL过滤后的溶液过净化柱，依次用3mL水和3mL甲醇洗涤并抽干后后用约6mL5%氨化甲醇洗脱。洗脱液用氮气吹干后用1mL

3、流动相定容，涡旋混合1分钟后经0.20μm有机相滤膜过滤后进样。2.色谱条件：C18色谱柱（150mm×4.6mm，5μm），以离子对缓冲溶液+乙腈（85+15）作为流动相，流量为1.0ml/min，柱温为35℃，检测波长为240nm，进样量为20μl。3.标准曲线的绘制：将三聚氰胺标准储备液（1.00×10^3mg/L）用甲醇-水溶液（1+1）逐级稀释得到浓度为1.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00mg/L的标准系列溶液，以峰面积（y）对浓度（x）绘制标准曲线。4.回收率实验：称取2g样品，用10mL1%三氯乙酸溶解后转移至2

4、5ml容量瓶中，用5mL刻度移液管准确移取4.0mL10μg/mL三聚氰胺溶液至容量瓶中，后续处理与1相同，进样。测量回收率。五、注意事项：1.待测样液中三聚氰胺的响应值应在标准曲线线性范围内，如超过线性范围，应稀释后再进行测定，同时做空白试验；2.实验要求调节离子对缓冲溶液与乙腈的比例来使pH达到3.0。