生态学实验二 不同生境植物叶绿素含量的测定与比较分析 2

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1、2013-4-10韩山师范学院王桔红实验二(续)植物不同种群叶绿素含量的测定及其统计分析2013-4-10韩山师范学院王桔红一、实验目的1.了解叶绿素测定方法(分光光度计)2.正确运用统计方法(1)统计植物叶绿素含量(2)分析和比较不同生境或不同种群植物叶绿素的差异2013-4-10韩山师范学院王桔红已知叶绿素a和叶绿素b的80%丙酮提取液在红光区的最大吸收峰分别为663nm和645nm.已知在波长663nm下,叶绿素a和b在该溶液中的吸光系数分别为82.04和9.27;在波长645nm下,叶绿素a和b在该溶液中的吸光系数分别为16.75和45.60;叶绿素含量测定二

2、、实验原理2013-4-10韩山师范学院王桔红可根据加和性原则列出以下关系式:D663=82.04Ca+9.27CbD645=16.75Ca+45.60Cb其中D663和D645分别为叶绿素溶液在波长D663和D645nm时的吸光度;Ca和Cb为叶绿素a、b的浓度,以mg/L为单位。2013-4-10韩山师范学院王桔红根据公式可得:Ca=12.7D663-2.69D645Cb=22.9D645-4.68D663叶绿素总量Ct=Ca+Cb2013-4-10韩山师范学院王桔红三、实验用具四、实验步骤1、确定所测定植物;2、选取叶片取3个不同生境(或不同地段)的同种植物叶片

3、各10片(来自10株个体)。叶片的年龄基本一致(不能取幼嫩叶片),地段之间相距较远(大于100m)。3、测定叶绿素含量2013-3-17韩山师范学院王桔红4、计算叶绿素含量种群AOD645为(1)_____(2)______(3)______OD663为(1)_____(2)______(3)______种群B种群C同上求平均值:OD645____,OD663_______求得Ca=Cb=CT=叶绿素a的含量(mg/g鲜重)=叶绿素b含量(mg/g鲜重)=叶绿素c含量(mg/g鲜重)=2013-3-17韩山师范学院王桔红5、722型分光光度计的使用(1)预热仪器将选择

4、开关置于“T”(透射率),打开电源开关,使仪器预热20分钟。为了防止光电管疲劳,不要连续光照,预热仪器时和不测定时应将试样室盖打开,使光路切断。(2)选定波长根据实验要求,转动波长手轮,调至所需要的单色波长.(3)调节T=0%轻轻旋动“0%”旋钮,使数字显示为“00.0”(此时试样室打开)(4)调节T=100%将盛参比液的的比色皿放入比色皿座架中的第一格内,并对准光路,把试样室盖子轻轻盖上,调节透过率“100%”旋钮,使数字显示正好为“100.0”。2013-3-17韩山师范学院王桔红(5)吸光度的测定将选择开关置于“A”(吸光度),盖上试样室盖子,将参比液置于光路中

5、,调节吸光度调节旋钮,使数字显示为“.000”。将盛有待测溶液的比色皿放入比色皿座架中的其它格内,盖上试样室盖,轻轻拉动试样架拉手,使待测溶液进入光路,此时数字显示值即为该待测溶液的吸光度值。读数后,打开试样室盖,切断光路。重复上述测定操作1~2次,读取相应的吸光度值,取平均值。(6)关机实验完毕,切断电源,将比色皿取出洗净,并将比色皿座架用软纸擦净。2013-3-17韩山师范学院王桔红注意事项:(1)为了防止光电管疲劳,不测定时必须将试样室盖打开,使光路切断,以延长光电管的使用寿命。(2)取拿比色皿时,手指只能捏住比色皿的毛玻璃面,而不能碰比色皿的光学表面。(3)比

6、色皿不能用碱溶液或氧化性强的洗涤液洗涤,也不能用毛刷清洗。比色皿外壁附着的水或溶液应用擦镜纸或细而软的吸水纸吸干,不要擦拭,以免损伤它的光学表面。2013-3-17韩山师范学院王桔红2013-4-10韩山师范学院王桔红6、以统计软件统计每个生境植物叶绿素含量的平均值、标准差、方差、中值、最大值、最小值,并做三线表;7、作出3个生境植物种群叶绿素含量图(折线图或柱形图);8、试用SPSS统计软件分析其差异性是否显著(F值?,P值?)。注:实验报告中写出所测植物、地点及数据、三线表、折线图或柱形图、SPSS分析结果2013-4-10韩山师范学院王桔红2013-4-10韩山

7、师范学院王桔红不同生境同种植物叶绿素含量是否有差异?原因是什么?五、结果与分析

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