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1、碱性脂肪酶生产工艺的研究南通生物化学制药厂周志林胡铁民杨蕴玉仲济华王德培山西生物研究所施巧琴前言,碱性脂肪酶是一种用途很广的生物催化剂它在碱性条件下对多种脂肪酸甘油醋具。,、、、、有很好的催化分解作用据国外报导碱性脂肪酶在制革毛纺绢纺洗涤剂医药等工业部门中有着广泛的应用和良好的效果。我国橡胶工业研究中首创用微生物碱性脂,,。肪酶作为浓缩胶乳的稳定剂提高胶乳的机械稳定性也获得了一定的进展在此之,。,,前国内对微生物碱性脂肪酶的研究尚未见报导因此开展碱性脂肪酶的研究特别,,,是进行碱性脂肪酶生产工艺的探讨为推向生产为我国酶制剂工业增加一个品种满
2、,。足工农业生产对碱性脂肪酶的需求无疑是一项十分迫切的任务、一发酵部份、一材料与方法试验菌种,。试验菌种系我们自己从我国土壤中分离得到菌株编号为一经多代诱变育,。种和自然分离证明是一株优良的碱性脂肪酶产生菌母瓶抱子培养基及培养条件斜面抱子的制备,。将供试菌株的抱子接种在用茄子瓶制备的蔡氏培养基上℃培养一周大米抱子的制备,。将供试菌株的抱子接种在用茄子瓶制备的大米培养基上℃培养一周大米抱子。供中试用大米培养基的制备方法是将经挑选过的颗粒饱满的大米与营养液未加琼。,,,脂的蔡氏培养基按的比例混和隔水蒸煮分钟取出摊开冷却使大米成,,℃,,松散状态
3、每只茄子瓶装蒸煮后的大米克湿热灭菌分钟冷却接入抱子。悬浮液即可摇瓶培养基及培养条件摇床,,。旋转式偏心距为转速为转分摇瓶培养基及培养条件,,,,,。,,大豆粉玉米糖糊情柠檬酸钠。。,。,,℃培养,自然毫升三角瓶装量毫升或毫升三角瓶装量毫升周期小时左右。,中试种子罐发酵罐及培养条件种子罐,,,‘升标准罐不锈钢结构搅拌转速为转分电机功井冠发酵罐,,,电。升标准罐普通钢板结构搅拌转速为转分机功率奄种子罐培养基及培养条件种。将大米袍子制备成袍子悬浮液,去除米粒,倒入子罐培养基与摇瓶培养基相同,。,,么,接种瓶内以压差法接入种子罐通气量罐温℃罐压。培
4、养。小。时发醉罐培养基及培养条件,,玉米,,,‘,、大豆粉大豆饼粉粉糊精,,。,,自然将培养成熟的种子移入发酵培养基内控制罐温℃通,,。气量罐压发酵小时左右中间’代谢控制测定方法均采用上海试剂三厂出品的精密试纸测定。,“。总糖先加酸水解而后按法测法通。氨基氮用甲醛法测定碱性脂肪酶活力,。聚乙稀醇川甘氨酸缓冲液配制,卜入,于取溶液力橄榄油转分组织捣才卒机中。捣碎分钟成乳化液,伪,反应液组成上述乳化液甘氨酸缓冲液酶液。,,,。稀释后的℃水浴酶解分钟川酒精丙酮混合液中止反应,,,。另作对照样对照样先加酒精丙酮混合液而后加酶液其它操作均同样品用酚酞
5、作,。指示剂用伪标准溶液滴定至微红丁计算公式,一义式中每毫升酶活力,—,样兄耗碱毫升数—对照耗碱笔升效—一一稀释倍数酶作用时间—碱性蛋白酶活力。“采用酚试剂法测定一’「,卜脂肪沁还涟碱令三,一本文所指的酶活力单位无论达诚蛋白晦均律为国际单〔“。位、二结果摇瓶条件试验不同初始对菌的生长和产酶的影响。一一霉,,,菌一般喜好在偏酸性环境中生长碱性脂肪酶产生菌系青霉属因此霉菌生长。,,的共性规律也同样适用于该菌一菌株在的酸性环境中抱子发芽早菌,。,丝生长速度最快摇瓶种子只须一小时即可达到稠厚稠度提高培养基的值菌丝生长速度减缓。当升至,,在其它条件相
6、同的条件下,摇呱种子则要到小时左一。,右才能达到同样稠度表但是适于菌丝生长的最佳不一定就是产酶的最适。,。本菌对最始的要求一般并不苛刻但在时相对产酶活性较高表,,,,因此在二级发酵中则利用上述特性种子培养基控制而发酵培养基则控制一表初始时菌丝生长速度的影响鲤兰尸些上一兰二。。、一’菌丝生长状况拼什份十一十于十十什卜表初始村产酶的影响初始。酶活力一立‘时去凡且山移自月曲︸培养温度对产酶的影响温,,,度对产酶有着较为明显的影响般在一℃范围内对产酶较为有利一,,。℃则对产酶有明显的影响结果见表表温度对产酶的衫响’’”’」一一一温度℃、一厂一异一一
7、、,飞卜一』一酶活力竺八一竺且竺上卫描报装量对产酶的影响,,空一碱性脂肪酶产生菌为好气性菌株在代谢过程中气量的大小对产酶有。,,,一定的影响在摇瓶试验中采用毫升三角瓶培养墓装量分别为毫升毫,,,,,“,。升毫升毫升毫升毫升七利试验结果如表表摇瓶装量甘产酶的影响摇瓶装量毫升’。、。一”一丽’一‘一,⋯一蔽一而一蔽不叮丽犷酶活力终二竺,,,即空,从试验情况看该茵对空气量的需求并不大装量为毫升时气量最大时,,,。酶活力反而较低装量为毫升时即空气量减小酶活力降低幅度不大从均衡水平,一般。。看还是以装量毫升为宜抱子接种量对产酶的影响,,,抱子接种量我
8、们仅做过两种水平即接种时抱子悬浮液为毫升和毫升两种每毫。。,,升袍子数为个无论在那种条件下接种量大的产酶水平总比接种量少的高,。一般约高出、所以抱子接种量的大小对产酶的影响是极为
