兽用疫苗保护剂和佐剂.ppt

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1、兽用疫苗冻干保护剂和佐剂冻干保护剂（稳定剂）保护剂：又称稳定剂（stabilizer），是指一类能防止生物活性物质在冷冻真空干燥时受到破坏的物质。（指对疫苗生产、血清制备等）保护剂用途（不同用途加不同保护剂,主要针对活的微生物或细胞）①菌种或毒种保存：常用甘油作保护剂②细胞株保存：常用二甲基亚砜(DMSO)DMSO:二甲基亚砜，一种细胞的保护剂③疫苗冷冻真空干燥制备时：加脱脂乳（或二甲基亚砜）和蔗糖等（不同国家有不同配方）④干扰素类生物活性物质的保存：加葡聚糖保护剂（protector）的分类分类：（根据其作用机理）——渗透剂：如二甲基亚砜（DMSO

2、）、甘油和蔗糖等——非渗透剂：如聚乙烯吡咯啶酮(PVP)和蛋白质等（根据其分子量大小）——高分子物质、低分子物质。（按其化学性质）——复合物、糖类、盐类、醇类、酸类和聚合物复合物脱脂乳、明胶、蛋白质、蛋白胨、糊精、血清、甲基纤维素等糖类蔗糖、乳糖、麦芽糖、葡萄糖、果糖等盐类乳酸钙、谷氨酸钠、氯化钠、氯化钾、醋酸铵、硫代硫酸钠等醇类山梨醇、甘油、甘露醇、肌醇、木糖醇等酸类柠檬酸、酒石酸、氨基酸等聚合物葡聚糖、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)等一些常用的冷冻干燥保护剂分类保护剂疫苗冻干保护剂组成1.营养液：可修复因冻干而受损的细胞，使冻干制品含有一定量

3、水分；可促进高分子物质形成骨架，使冻干制品呈多孔的海绵状，增加溶解度2.赋形剂：防止低分子物质的碳化和氧化，保护活性物质不受加热影响使冻干制品形成多孔性、疏松的海绵状物，增加溶解度3.抗氧化剂：抑制冻干制品中的酶作用，增加生物活性物质在冻干后贮存期间的稳定性，如维生素C、维生素E和硫代硫酸钠等。①防止活性物质失去结构水及阻止结构水形成结晶而导致生物活性物质的损伤；②降低细胞内外的渗透压差、防止细胞内结构水结晶，以保持细胞的活力；③保护或提供细胞复苏所需的营养物质，有利于生活力的复苏和迅速修复自身。冻干保护剂作用机制二、影响保护剂效能的因素1、保护剂种

4、类:根据微生物种类或者用途来添加不同种类保护剂。２、保护剂浓度：严格按照配方执行。３、保护剂配制方法：糖类不能用121℃高压灭菌处理。４、保护剂酸碱度（PH值）：主要对M的影响。三、常用的冻干保护剂（稳定剂）明确不同种类微生物需要添加不同保护剂（一）细菌的保护剂①需氧或兼氧厌氧菌：５％蔗糖脱脂乳或５％蔗糖、1.5％明胶；②厌氧性细菌：含1.5％谷氨酸钠的１％乳糖或10％脱脂乳或7.5％葡糖血清。注：脱脂乳：20％脱脂奶粉溶于水配制而成。（二）病毒的保护剂①5%蔗糖脱脂乳；②马立克814活细胞疫苗:保存液氮.稳定剂为10%二甲基亚砜和50%犊牛血清的1

5、99液。注意:微生物保护剂缓冲液的组成比例，不同厂家有不同的配方。1．5%蔗糖（乳糖）脱脂乳保护剂蔗糖（或乳糖）5g，加脱脂乳至100ml，充分溶解后，110~116℃高压灭菌30~40min。2．明胶蔗糖保护剂明胶2%~3%（g/m1）、蔗糖5%（g/m1）、硫脲1%~2%（g/m1）。先将12%~18%明胶液、30%蔗糖液和6%~12%硫脲液加热溶解，116℃高压灭菌30~40min；3．SPGA保护剂兽医生物制品常用的保护剂蔗糖76.62g、磷酸二氢钾0.52g、磷酸氢二钾1.64g、谷氨酸钠0.83g、牛血清白蛋白10g、加去离子水至1000

6、ml，混合溶解，过滤除菌。免疫佐剂一、佐剂概念与作用机理1.佐剂（新概念）：凡是可以增强抗原特异性免疫应答的物质称为佐剂。佐剂（旧概念）：当一种物质先于抗原或与抗原混合或同时注射于动物体内，能非特异性地改变或增强机体对该抗原的特异性免疫应答,发挥其辅佐作用的物质.以前作为佐剂使用时没有免疫原性，但现在有所改变，如IL-2是佐剂和IL-8一类细胞因子佐剂却不一样,具有免疫调节和免疫增强作用,单独使用时却具有免疫原性。注意:佐剂和免疫增强剂的关系?有时佐剂也是免疫增强剂.作用特点：①明显增强抗原性微弱的物质诱导机体产生特异性免疫应答。②用最少的抗原和最少

7、的接种次数，产生足够的免疫应答。免疫佐剂作用机理①改变正常免疫机能，吸引大量巨噬细胞以吞噬抗原；②改变抗原的构型，使抗原物质降解，并加强其免疫原性；③延长抗原在组织内的贮存时间，使抗原缓慢降解和缓释，并发挥免疫系统的细胞间协同作用（巨噬细胞与T细胞，T细胞与B细胞）。作用方式①抗原递呈（antigenpresentation）②抗原寻的（antigentargeting）③免疫调节（immunemodulation）作用机理①抗原递呈：指抗原分子递呈给T细胞的方法。佐剂与疫苗联合使用，有助于抗原性物质在胞内被加工，被MHC分子特异性的结合、保护、运输

8、并递呈给效应细胞。②抗原寻的（antigentargeting）指抗原传递给免疫系统中适当效应细胞的效率。包