动物细胞培养所需的基本条件.ppt

《动物细胞培养所需的基本条件.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、动物细胞培养所需的基本条件一、动物细胞的培养器材的清洗和消毒⑴器材的清洗浸泡、刷洗、泡酸、冲洗⑵器材的消毒灭菌物理消毒化学消毒动物细胞培养基的组成和制备水和平衡盐溶液天然培养基合成培养基无血清培养基水：三蒸水或超纯水平衡盐溶液（BSS）主要由无机盐和葡萄糖组成，具有维持细胞渗透压、调控培养液酸、碱度平衡的功能。􀂄例如：Hanks液注：酚红在培养基中被用来作为pH值的指示剂：中性时为红色，酸性时为黄色，碱性时为紫色。BSS的用途洗涤组织细胞基础溶液维持正常的渗透压及pH值提供能量BSS的配制一般使用三蒸水配制配制好的液体呈桃红色，没有浑浊和沉淀。要避免钙离子，镁离子沉淀，单独

2、溶解。灭菌后要补充一定的水分如有沉淀或浑浊，应重新配制。动物细胞的培养基的种类和组成分3类:⒈天然培养基⒉合成培养基⒊无血清培养基（1）天然培养基动物血清（胎牛血清、小牛血清）、组织提取液、鸡胚胎汁等。优点：营养价值高缺点：成分复杂、来源有限、成本较高血清（serum）：纤维蛋白已被除去(如通过血凝或去纤维蛋白法)的血浆。血清培养基的优点：含有丰富的利于细胞生长的成分血清培养基缺点：（1）动物血清来源有限，价格高，不宜大量使用（2）动物血清成分复杂且成分不稳定，使生长过程不易检测控制。（3）虽然血清对细胞生长有效，但会对后期培养产物的分离、提纯以及检测造成一定困难。血清的生

3、物功能1.提供基本营养物质：氨基酸、维生素、无机物、脂类物质、核酸衍生物等，是细胞生长必须的物质。2.提供激素和各种生长因子：胰岛素、肾上腺皮质激素（氢化可的松、地塞米松）、类固醇激素（雌二醇、睾酮、孕酮）等。生长因子如成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、血小板生长因子等。3.提供结合蛋白：结合蛋白作用是携带重要的低分子量物质，如白蛋白携带维生素、脂肪、以及激素等，转铁蛋白携带铁。结合蛋白在细胞代谢过程中起重要作用。4.对培养中的细胞起到某些保护作用：提供促接触和伸展因子使细胞贴壁免受机械损伤。有一些细胞，如内皮细胞、骨髓样细胞可以释放蛋白酶，血清中含有抗蛋白酶成分，起到中和

4、作用。可以使用血清来终止胰蛋白酶的消化作用。因为胰蛋白酶已经被广泛用于贴壁细胞的消化传代。血清蛋白形成了血清的粘度，可以保护细胞免受机械损伤，特别是在悬浮培养搅拌时，粘度起到重要作用。血清还含有一些微量元素和离子，他们在代谢解毒中起重要作用合成培养基􀂄优点：成分已知，便于对实验条件进行控制。􀂄缺点：无法替代一些未知成分􀂄解决途径——合成培养基中添加小牛血清，彼此互补，成为“完全培养基”目前常用的合成培养基包括：MEM、DMEM、F12、M199等。MEM培养基：厄尔利（Earle）于1951年开发成功。含有少量氨基酸、维生素、谷氨酰胺以及必须的无机盐，组成简单。DMEM培养

5、基：由杜尔贝科（Dulbecco）等在MEM培养基基础上研制而成，增加了各已有成分的含量，同时又根据葡萄糖高低分为高糖型（4,500mg/L）和低糖型（1,000mg/L），高糖型适合生长较快、贴附性差的细胞（例如肿瘤细胞）培养。⑴氨基酸：培养基提供必需的12种氨基酸⑵维生素：B族维生素⑶糖类：大多以葡萄糖为碳源⑷无机盐⑸其它成分：嘌呤，嘧啶以及抗氧化剂⒊无血清培养基①提高重复性②减少微生物污染③供应充足稳定④产品易纯化⑤避免血清因素对细胞的毒性⑥减少血清中蛋白对生物测定的干扰无血清培养基(Serumfreemedium,SFM)是不含血清的动物细胞培养基，由基础培养基和添

6、加组分组成。试图全部替代血清成分。基础培养基较常用的是DMEM、F12培养基。􀂄无血清培养基加入添加剂⑴生长因子和激素⑵结合蛋白：转铁蛋白和白蛋白⑶贴附因子和伸展因子⑷有利细胞生长的因子和元素获得细胞细胞的全能性植物体培养结果或细胞产物快速繁殖、培育无病毒植株等培养目的葡萄糖、动物血清蔗糖、植物激素培养基特有成分液体培养基固体培养基培养基性质细胞增殖原理动物细胞培养植物组织培养比较项目植物细胞和动物细胞培养的比较细胞群体动物细胞培养所需的基本条件细胞体外培养基本条件:①无菌②营养充足,防止有害物质③氧气④随时清除代谢有害物质⑤良好的生存外环境⑥及时分种影响动物细胞体外生长的

7、因素包括生物因素、化学因素、物理因素。生长条件的控制主要包括温度、pH、渗透压、气体等。􀂄温度：人类和哺乳类动物细胞培养适宜温度为36.5±5℃，。􀂄pH：哺乳动物细胞为7.1-7.3。􀂄渗透压：细胞在高渗透压或低渗透压溶液中会发生皱缩或肿胀，甚至破裂。（BSS溶液）􀂄气体：细胞的生长代谢离不开气体，主要包括O2和CO2。二氧化碳培养箱。第十二章动物细胞培养技术动物细胞培养是将动物组织或细胞从机体取出，分散成单个细胞，给予必要的生长条件，模拟体内的生长环境，使其在体外继续生长与增殖的技术。原代培养