《动物细胞培养》ppt课件

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1、2.2动物细胞工程单克隆抗体等动物细胞工程常用的技术动物细胞培养动物细胞核移植动物细胞融合是其他动物细胞工程技术的基础。2001年2月，一只特别的活老鼠在北京引起轰动———这是有着一对红眼睛的、尾巴长长的、浑身没毛的小白鼠。与众不同的是，这只小白鼠的背上，竟长着一只几乎与身子一般大小的“人耳”。这只老鼠背上的“人耳”，展示的是我国“863”计划的一项科研成果。这只老鼠身上的“人耳”是由上海市第九人民医院副院长、整复外科主任曹谊林教授利用组织工程技术复制出来的。背上长“人耳”的老鼠从上海空运至北京后，住进了一家大饭店。“人耳鼠”展出时，被放到一个透明的盒

2、子里，里面没有水，没有饲料，也没有过滤空气的装置，因此，每次展出时间不过一两个小时。长“人耳”的老鼠亮相京城，透露了一条信息———随着人类生命奥秘的揭晓，有朝一日人体就会像一辆汽车一样，哪个零件坏了，可再买一个新的换上。1991年，曹谊林教授在美国哈佛大学医学院和麻省大学医学中心学习期间，取得在国际医学界引起震撼的“老鼠背上长人耳”这一软骨细胞移植术的新成就。曹谊林教授说，“人耳鼠”的制作关键在“人耳”，先用一种高分子化学材料聚羟基乙酸做成人耳的模型支架，让细胞在这个支架上繁殖生长，然后，在裸鼠的背上割开一个口子，将已经培养好的“人耳”植入后缝合。“人

3、耳”支架最后会自己降解消失，于是，“人耳”便与老鼠浑然成为一体。为什么要进行动物细胞培养?1.动物细胞培养如何进行细胞培养?培养时又需要提供哪些必要条件呢？2.2.1动物细胞培养和核移植技术从动物机体中取出相关组织，将它们分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。1.1概念1.2动物细胞培养过程胚胎或幼龄动物的组织器官细胞悬液10代细胞50代细胞剪碎胰蛋白酶洗涤、稀释、分离原代培养用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是蛋白质。动物细胞培养适宜的PH为7.2—7.4，此环境下胃蛋白酶（2.0）没有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)

4、的活性较高。比老龄动物的组织细胞增殖能力强，有丝分裂旺盛。分化程度越低，增殖能力越强，越容易培养。动物细胞培养不能最终培养成生物体细胞增殖缓慢，核型可能变化动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质，将细胞网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织和器官。贴壁生长接触抑制10代以内，保持正常二倍体核型传代培养多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中，根据你所学的内环境的知识，思考以下问题：1.体外培养细胞时需要提供哪些物质？2.体外培养的细胞需要什么样的环境条件？讨论葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、促生长因子和动物血清等。适宜温度、PH和气体环境；无菌无毒

5、环境获得细胞细胞的全能性细胞或细胞产品新的个体或细胞产品培养结果或细胞产物快速繁殖、培育无病毒植株等培养目的葡萄糖、动物血清促生长因子蔗糖、植物激素培养基特有成分液体培养基固体培养基培养基性质细胞增殖原理动物细胞培养植物组织培养比较项目植物细胞和动物细胞培养的比较大规模的生产有重要价值的生物制品如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体为基因工程技术提供受体细胞培养健康细胞用于烧伤病人皮肤移植有毒物质的检测细胞的生理、药理、病理研究如用于筛选抗癌药物等，为治疗和预防癌症及其他疾病提供依据动物细胞培养技术的应用2.动物细胞核移植技术和克隆动物将动物的一个细胞核，移入

6、一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成为一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体（克隆动物）分类胚胎细胞核移植：体细胞核移植：细胞分化程度低，恢复全能性容易细胞分化程度高，恢复全能性不容易2.1动物细胞核移植概念：2.2体细胞核移植的过程：请看教材P48图2-21思考：1.核移植的受体细胞是什么？处在什么时期？2.通过什么手段激活受体细胞，构建重组胚胎？MⅡ中期卵母细胞诱导方法：物理或化学方法激活受体细胞，完成细胞分裂和发育进程。主要用于制备单克隆抗体获得杂种植株用途物理、化学方法（同左）灭活的病毒物理（离心、振荡、电刺激）化学（聚乙二醇

7、）诱导方法使细胞分散后诱导细胞融合去除细胞壁后诱导原生质体融合细胞融合的方法细胞膜的流动性细胞膜的流动性、植物细胞全能性原理动物细胞融合植物体细胞杂交比较项目植物、动物细胞融合的比较讨论：1.在体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之前，为什么必须先去掉受体卵母细胞的核？为使核移植的胚胎或动物的遗传物质全部来自有重要利用价值的动物提供的体细胞，在供体细胞的细胞核移至受体细胞之前，必须将受体细胞的遗传物质去掉或将其破坏。培养的动物细胞一般当传代至10～50代左右时，部分细胞核型可能会发生变化，其细胞遗传物质可能会发生突变，而10代以内的细胞一般能保持正常的二倍

8、体核型。因此，在体细胞核移植中，为了保证供体细胞正常的遗传基础，通常采用传代10代以内的细胞。