《动物细胞培养HXY》PPT课件

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1、第四章动物细胞培养1动物的细胞和组织培养：从动物体内取出组织或细胞，模拟机体内生理条件，在体外建立无菌、适温和一定营养条件等，使之生长和生存，并维持其结构和功能的技术。24.1培养细胞的生物学特征4.1.1体外培养细胞的分型按生长方式分为3型：贴壁型细胞:附着在某一固相支持物表面才能生长的细胞。悬浮型细胞:不必附着于固相支持物表面，在悬浮状态下即可生长的细胞。半贴壁型细胞3（一）贴附型细胞：大多数培养细胞贴附生长，属于贴壁依赖性细胞贴附:是大多数有机体细胞在体内生存和生长发育的基本存在方式结果:基于贴附特性，使细胞与细胞之间相互结合形成组织

2、，有机体的绝大多数细胞必须贴附于一固相表面才能生存和生长。培养时：这些细胞被放到体外环境中以后,同样需要贴附于某一固相表面才能生存和生长，因而属于贴附型细胞贴附(锚定或锚着)依赖型(性)细胞细胞在体内、外的贴附方式存在差异体内：贴附是全方位,外形具有复杂的立体特征体外：多数情况，细胞只有一个附着平面，外形一般与体内时明显不同贴附的固相表面：玻璃、聚苯乙烯塑料按照培养细胞的主要形态，可分为四大类型1、成纤维细胞型：名称：成纤维细胞来源：由中胚层间充质组织起源的组织真正的成纤维细胞：心肌，平滑肌，成骨细胞，血管内皮形态：似体内成纤维细胞的形态，

3、胞体梭形或不规则三角形，胞质向外伸出2—3个长短不等的突起，中有卵圆形核生长特点：排列成放射状，漩涡状，并不紧靠连成片，细胞-细胞接触易断开而单独行动，游离的单独的成纤维样细胞，常有几个伸长的细胞突起2、上皮细胞型名称：仅形态上似体内，实际上不完全相同来源：来源于外胚层、内胚层细胞,如：皮肤及其衍生物,消化道，乳腺，肺泡,上皮性肿瘤形态：类似体内的上皮细胞，扁平，不规则多角形，中有圆形核生长特点：易相连成片，相靠—紧密相连成薄层—铺石状生长时呈膜状移动，很少脱离细胞群而单个活动3、游走细胞型：呈散在生长，一般不连成片，胞质常突起，呈活跃游走

4、或变形运动，方向不规则。此型细胞不稳定，有时难以和其他细胞相区别。4、多形型细胞：有一些细胞，如神经细胞难以确定其规律和稳定的形态，可统归于此类。（二）悬浮型细胞：见于少数特殊的细胞，如某些类型的癌细胞及白血病细胞。胞体圆形，不贴于支持物上，呈悬浮生长。这类细胞容易大量繁殖。来源：血，脾或骨髓，血中白细胞癌肿细胞特点：在悬浮中生长良好，细胞圆形、单个或小细胞团优点：生存空间大，提供数量大，传代方便(不需消化)，易于收获，可获得稳定状态缺点：纯化不方便，不能通过离心将死、活细胞分离4.1.2培养细胞的生长特点1.贴附贴壁→伸展影响因素：钙离子

5、机械、物理因素生物因素13细胞贴壁过程152.接触抑制细胞接触→停止移动正常细胞成单层生长肿瘤细胞无接触抑制，可以堆积生长。接触抑制可作为区分正常细胞与癌细胞的标志之一163.密度抑制细胞增殖，密度加大，培养液营养成分消耗，细胞代谢物增多，导致发生密度抑制，细胞分裂停止4.1.3培养细胞的生长和增殖过程（一）单个细胞的生长过程（二）细胞系的生长过程（三）每代细胞的生长过程（一）单个细胞的生长过程细胞周期：一个母细胞分裂结束后形成的细胞到下一次再分裂结束形成两个子细胞的时期。（二）细胞系的生长过程培养细胞的生命期：是指细胞在培养中持续增殖和生

6、长的时间。包括原代培养期、传代期及衰退期。细胞的生长曲线1．原代培养期：从体内取出组织,接种培养到第一次传代阶段（初代培养）特点：1-4周、细胞呈活跃的移动、可见细胞分裂、形态结构和功能活动上与体内原组织相似性大、多呈二倍体核型细胞群是异质的，细胞克隆形成率很低，即细胞独立生存性差。2．传代期：初代培养细胞一经传代后便改称做细胞系。在全生命期中此期的持续时间最长。在培养条件较好情况下，细胞增殖旺盛，并能维持二倍体核型，呈二倍体核型的细胞称二倍体细胞系。为保持二倍体细胞性质，细胞应在初代培养期或传代后早期冻存。一般情况下当传代10～50次左右

7、，细胞增殖逐渐缓慢，以至完全停止，细胞进入第三期。3．衰退期：此期细胞仍然生存，但增殖很慢或不增殖；细胞形态轮廓增强，最后衰退凋亡。在细胞生命期阶段，少数情况下，在以上三期任何一点，由于某种因素的影响，细胞可能发生自发转化。转化的标志之一是细胞可能获得永生性或恶性性。细胞永生性也称不死性，即细胞获持久性增殖能力，这样的细胞群体称无限细胞系，也称连续细胞系。无限细胞系的形成主要发生在第二期末，或第三期初阶段。细胞获不死性后，核型大多变成异倍体。细胞转化亦可用人工方法诱发，转化后的细胞也可能具有恶性性质。（三）每代细胞的生长过程所谓细胞的“一代

8、”是指从细胞接种到分离再培养的一段时间。这已成为培养工作中的一种习惯说法，它与细胞倍增一代非同一含义。如某一细胞系为第153代细胞，即指该细胞系已传代153次。它与细胞世代或倍增