酵母双杂交原理和应用.ppt

《酵母双杂交原理和应用.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在PPT专区-天天文库。

1、蛋白质相互作用研究——酵母双杂交系统专业:XXX学生：XXX研究背景系统分类系统原理操作过程研究背景蛋白质---蛋白质的相互作用是细胞生命活动的基础和特征。例如细胞与细胞、细胞与基质的连接；细胞信号转导；代谢网络；以及转录、翻译调节等.通过酵母系统进行基因水平的检测，是采用体内实验来研究蛋白间的相互作用。所有操作均是在核酸水平上进行，无需纯化大量的蛋白，并可精确地测定蛋白质间弱相互作用。研究背景酵母双杂交系统分类核内蛋白质相互作用的研究膜蛋白、膜相关蛋白和可溶性蛋白间相互作用的研究核内蛋白质间相互作用

2、的研究原理：转录激活因子通常有两个可分割的、功能相互独立的结构域，即DNA特异性结合结构域（DNA-bindingdomain，DBD）与转录激活结构域（transcriptionalactivationdomain,AD）。DBD-Bait和prey-AD这两个融合蛋白是如何构建的？又是如何进入同一个酵母细胞的呢？因此完整的酵母双杂交由三个部分组成：bait载体，prey载体，和带有报告基因的酵母菌株。根据目前通用的系统中DBD来源的不同，主要分为GAL4系统和LexA系统。GAL4系统来源于酵母；

3、LexA系统的BD来源于原核生物，在真核生物内缺少同源性，因此可以减少假阳性的出现。应用定义两个已知蛋白质间的相互作用；筛选新的蛋白质间相互作用（即cDNA文库筛选）；绘制蛋白质相互作用图谱；寻找具有药物治疗作用的小分子多肽。膜蛋白、膜相关蛋白和可溶性蛋白间相互作用的研究原理：泛素（ubiquitin）N-terminusLysine63Lysine48C-terminus分离的泛素系统分离泛素（split-ubiquitin）系统应用确定两个膜蛋白的相互作用；从cDNA文库中筛选相互作用的蛋白质。T

4、HANKYOU