食品卫生微生物 学检 验4.ppt

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1、食品卫生微生物学检验四大肠菌群测定之三：伊红美蓝平板可疑大肠菌群菌落1/2革兰染色，1/2接种乳糖发酵管EC肉汤产气的转种伊红美蓝平板。实验流程：伊红美蓝平板可疑单菌落各1/2→革兰染色镜检、接种微量乳糖发酵管。EC肉汤产气→伊红美蓝平板分离单菌落。大肠菌群检验程序检样↓稀释↓乳糖胆盐发酵管,36℃±1℃，24h±2h↓↓不产气产气↓↓大肠菌群阴性伊红美蓝琼脂平板,36℃±1℃，24h±2h↓↓↓报告革兰染色乳糖发酵管,36℃±1℃，24h±2h↓↓↓↓革兰阳性革兰阴性无芽胞杆菌产气不产气↓↓↓↓大肠菌群阴性大肠菌群阳性大肠菌群阴性↓↓↓报告报告报告大肠菌群证实试验——菌

2、落的挑选国家标准中，需要对初发酵阳性培养物接种伊红美蓝平板分离培养，对典型和可疑菌落进行观察和证实试验。由于大肠菌群是一群细菌的总称，在平板上大肠菌群菌落的色泽、形态等方面较大肠杆菌更为复杂和多样，而且与大肠菌群的检出率密切相关。国家标准方法规定，伊红美蓝平板作为分离培养基。在该平板培养基上，大肠菌群菌落呈黑紫色具有金属光泽或无光泽时，检出率最高；红色、粉红色菌落检出率较低。挑取菌落数与大肠菌群的检出率有密切关系，只挑取一个菌落，由于机率问题，尤其当菌落不典型时，很难避免假阴性的出现。所以挑菌落一定要挑取典型菌落，如果没有典型菌落则应多挑几个，以免出现假阴性。菌落选中以后

3、，画个圆圈作标记，1/2做革兰染色镜检、1/2做乳糖发酵试验。大肠菌群测定之三伊红美蓝平板上可疑大肠菌群菌落1/2做革兰染色，另1/2接种乳糖发酵管。粪大肠菌群EC肉汤产气的转种伊红美蓝平板。每人1个平板，将EC肉汤管摇均匀，用接种环取菌液，常规方法分离单菌落。接种环烧灼灭菌，平板作标记，以组为单位，集中培养。加生理盐水3～4ul，2滴。黑紫色菌落少许与盐水混匀，涂成1cm2。涂毕→环移至涂膜中央侧立，环内菌膜破裂，接种环→灭菌。涂片涂片干燥固定革兰染色法(gramstaining)涂片→干燥→固定→↓结晶紫→初染1分钟→水洗→↓卢戈碘液→媒染1分钟→水洗→↓95％乙醇→

4、脱色约20秒钟→水洗→↓稀释复红→复染1分钟→水洗→↓吸干,镜检。★取菌适量,涂片均匀,水洗轻缓,脱色适当。★影响革兰染色的关键步骤是涂片和脱色。黑紫色具有金属光泽菌落1/2→微量乳糖发酵管2-3cm37℃，24小时粪大肠菌群证实试验将所有产气的EC肉汤管,分别转种于伊红美蓝平板上，分离单菌落,37℃培养18-24小时,凡平板上有典型菌落者，则证实为粪大肠菌群阳性。5～10mm2↓↙＞30条线平板划线不少于150条线食品卫生微生物学检验四大肠菌群测定之三：伊红美蓝平板可疑大肠菌群菌落1/2革兰染色，1/2接种乳糖发酵管EC肉汤产气的转种伊红美蓝平板。实验流程：伊红美蓝平板

5、可疑单菌落各1/2→革兰染色镜检、接种微量乳糖发酵管。EC肉汤产气→伊红美蓝平板分离单菌落。常用器材摆放顺序：电源插座→试管架→酒精灯→污物盘。试管架上器材：靠近插座一侧第1列放置接种针,第2列放置接种环，另一侧中间两行放置油性笔和打火机。※器材使用后，必须放回原处，依次摆整齐。实验室器材整齐有序