血清蛋白与免疫固定final.ppt

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1、孙丽生化室2015–7-1血清蛋白电泳与免疫固定血清含有各种蛋白质，其等电点均在pH7.5以下，若置于pH8以上的缓冲液电泳时均游离成负离子，再向正极移动。由于其等电点，分子量和分子形状各不相同，其电泳速度也就不同，故可将血清中蛋白质区分开来。分子量小，带电荷多者，泳动速度就快，反之亦然。按其泳动速度顺序把血清蛋白粗略分为白蛋白，α1、α2、β及γ球蛋白。常用的电泳技术醋酸纤维素薄膜电泳凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳:琼脂糖凝胶适用于蛋白质和核酸的电泳支持介质.聚丙烯酰胺凝胶电泳:最常用的定性分析蛋白质的电泳方法，特别是用于蛋白质纯度检测和测定蛋白质分子量.毛细管电泳:经典电泳技术和现代

2、微柱分离相结合的产物在电场内,每种蛋白在下列因素的影响下,以特定的速度移动:由电场（电压）及缓冲液的离子强度电泳载体胶片的蒸发程度载体的多孔性血清蛋白电泳的原理_____加样点带强负电荷的蛋白快速地向正极方向移动带微弱负电贺的蛋白由于受电子力的作用下，向负极方向移动+负极-正极蛋白在琼脂糖上电泳的原理______在血清蛋白电泳试剂中，蛋白质在PH值为8.8含缓冲液的琼脂糖凝胶中被分离，然后用氨基黑对其进行染色，再用酸性溶液进行脱色。正常血清蛋白电泳图谱α-2巨球蛋白白蛋白GammaBetaAlpha-2Alpha-1免疫球蛋白C3、C4α-1抗胰蛋白酶结合珠蛋白转铁蛋白白蛋白α-

3、1酸性糖蛋白低密度脂蛋白正常参考范围：Alb:57%-68%α1:1.0%-5.7%α2:4.9%-11.2%β:7%-13%γ:9.8%-18.2%血清蛋白电泳的目的是什么？检测异常:含量的变化:条带中蛋白含量的增加或减少性质的变化:异常条带的出现血清白蛋白血清白蛋白是血清总蛋白的主要蛋白质成分，由肝脏合成。它在维持血液胶体渗透压、体内代谢物质运输、营养等方面均起着很重要的作用。白蛋白部分的变化白蛋白浓度升高：(1)常见于严重失水，血浆浓缩所致。如严重脱水、休克、严重烧伤、急性出血、慢性肾上腺皮质功能降低症。(2)静脉输注白蛋白过多。(3)尚未发现单纯白蛋白浓度升高的疾病。白蛋

4、白浓度降低：(1)白蛋白合成不足:①急性或慢性肝脏疾病，由于白蛋白半衰期较长，在一般急性肝病患者中，其浓度变化不明显；②蛋白质营养不良或吸收不良。(2)白蛋白丢失：①各种肾病，Alb从尿中丢失；②肠道炎症性疾病；③烧伤及渗出性皮炎等，可从皮肤丧失大量Alb。(3)白蛋白分解代谢增加：组织损伤（手术和创伤）或炎症使组织分解增加，需要Alb大量补充。(4)白蛋白的分布异常:肝硬化导致门脉高压时，由于合成减少和大量Alb漏入腹水的双重原因，使血浆Alb显著减少。(5)无白蛋白血症：是极少见的遗传性缺陷，血浆Alb含量常低于1g/L，可能无水肿症状出现，部分原因是血管中球蛋白含量代偿性升

5、高所致（一般血浆Alb低于28g/L时，会出现水肿）。双白蛋白:持久型：家族性血清白蛋白异常的疾病，极少见。暂时型：由药物引起如：大量使用抗生素或水杨酸类药物时，可形成快泳动性的白蛋白成分，治疗中断即逐渐消失。双白蛋白血症gba2a1Albα1球蛋白区域的变化减少:肝细胞的缺失，营养不良,蛋白的丢失,先天性的a1抗胰蛋白缺乏增加:炎症引起a1区域的增高：a1酸性糖蛋白，a1抗胰蛋白酶和结合珠蛋白的增加。急性炎症gba2a1Albα2球蛋白的变化减少:肝细胞的缺失,营养不良,蛋白的丢失增加:炎症(伴随a1区域的增高),肾病综合症(a2巨球蛋白的增加伴随b区域的增高，同时白蛋白减少)

6、。出现游离轻链或完整的免疫球蛋白伴随着a2的变化。双条带:溶血标本：结合珠蛋白-血红蛋白结合,观察标本的颜色，结合珠蛋白显型,b脂蛋白的异常移动：比正常b脂蛋白移动速度快，出现单克隆条带。双a2条带:溶血血清标本gba2a1Alb肾病综合症gba2a1Alb%g/LNV%NVg/L白蛋白31.313.160-7142-50a12.91.21.4-2.91-2a228.912.17-115-8b23.49.88-136-9g13.55.69-166-11总蛋白=42g/lβ球蛋白的变化减少:肝细胞的缺失,营养不良,蛋白的丢失.增加:贫血症的转铁蛋白增加,β脂蛋白的增加,酒精性硬化（

7、肝硬化）中的β-γ桥连,出现单克隆成分.肾病综合症酒精性硬化（肝硬化）中的β-γ桥连gba2a1白蛋白γ球蛋白区域的变化减少:在儿童和青少年中属生理现象（不包括带着母亲所有IgG的新生婴儿）免疫球蛋白的缺失，肾上腺皮质类脂醇，免疫抑制性治疗,化疗或放射性治疗，轻链骨髓瘤增加:肝的感染、硬化、炎症而出现的多克隆条带（部分原因是抗原刺激肝外网状内皮系统并诱发免疫反应产生抗体所致）γ球蛋白区域的变化异常条带:出现纤维蛋白原：血浆，γ区的单克隆条带：恶性或良性寡克隆条带：一般与自身免疫类