玉米种子纯度检验标准.doc

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1、玉米种子纯度检验标准［作者：w1gju    来源：丹玉种业    点击数：779    更新时间：2007-7-20    文章录入：w1gju］【字体：】中华人民共和国农业行业标准                            玉米种子纯度盐溶蛋白电泳鉴定方法  NY／T 449--2001                                        Identification purity of maize variety                                        using salting in pr

2、otein eletrohporesis            1范围              本标准规定了玉米单交种及亲本的真实性和品种纯度的室内检测方法。              本标准适用于玉米单交种及亲本的真实性和品种纯度鉴定。            2引用标准                          下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。              GB／T 3543.2－1995农作物种子检验规程扦样  

3、            GB／T 3543.5—1995农作物种子检验规程真实性和品种纯度鉴定              GB 4404.1－1996粮食作物种子禾谷类            3定义              本标准采用下列定义。            3．1种子真实性              供检品种与文件记录（如标签等）是否相符。            3．2品种纯度              品种在特征特性方面典型一致的程度，用本品种的种子数占供检本作物样品种子数的百分率表示。            ［GB／T 3543．5］           

4、 3．3育种家种子              育种家育成的遗传性状稳定的品种或亲本种子的最初一批种子，用于进一步繁殖原种的种子。            4原理              从玉米种子中提取的盐溶蛋白在聚丙烯酸胺凝胶的浓缩效应、分子筛效应和电泳分离的电荷效应作用            下进行分离，通过染色显示蛋白质谱带类型。不同玉米品种由于遗传组成的不同，种子内所含的蛋白质种类有差异，这种差异可利用电泳图谱加以鉴别，从而对种子真实性和品种纯度进行鉴定。            5仪器设备及试剂            5．1仪器设备              电泳

5、仪（500 V士5 V连续可调、0～400 mA连续可调、额定输出功率200 W）、垂直板夹心式电泳槽、单籽粒粉碎器、天平（感量 0. 01g、0. 001g、0. 0001g各一台）、酸度计、磁力搅拌器、高速离心机（5 000 r／min以上）、电冰箱、电炉、离心管（ 1. 5   mL）、离心管架、移液管（ 10 mL、5mL、2 mL各两支）、微量进样器（ 5～IOO μL）、恒温箱、观片灯等。            5．2试剂                          丙烯酸胶、N，N’一亚甲基双丙烯酸胺、乳酸、乳酸钠、甘氨酸、抗坏血酸、硫酸亚铁、氯化钠、

6、蔗糖、甲基绿、基绿、三氯乙酸、过氧化氢、考马斯亮蓝R25O、无水乙醇、正丁醇等（所用试剂均为分析纯，所用水均为去离子水）。            6溶液配制            6．1电极缓冲液              称取甘氨酸 6.00 g，倒入2 000 mL烧杯中，加入 1800 mL去离子水溶解，用 2.0 ml。乳酸调至pH3.3，再加去离子水定客至 2 000 mL，混匀。            6．2样品提取液              称取氯化钠 5.80 g，蔗糖200.00 g，甲基绿0.1515 g，倒人 I000 mL烧杯中，加去离子水800

7、 ml。溶解，加热至微沸，放至室温，再用去离子水定容至 I000 mL。在 4℃条件下保存。            6.3分离胶缓冲液              取1.43 mL乳酸钠于 I000 mL烧杯中，加去离子水 980 mL，用乳酸调至pH3．0，再加去离子水定容至 IOOO mL，贮于棕色瓶中，在4℃条件下保存。            6．4分离胶溶液              称取丙烯酸胺112.50g，N，N’一亚甲基双丙烯酷胺3.75g，抗坏血酸0. 25g，硫酸亚铁8.Omg，用分离胶缓冲液溶解，再用分离胶