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长春中医药大学本科生毕业论文年级:专业：药学班级：一班学号：37号 莲芝消炎片的提取工艺研究指导教师：实习单位：江苏康缘药业股份有限公司论文提交日期：2011年6月论文答辩日期：2011年6月答辩组组长：答辩组成员：摘要11弓I言21.1材料与仪器22实验方法22.1仪器与材料22.1.1仪器22.1.2药材2 2.1.3试剂22.2实验方法的选择32.2.1因素和水平的确定32.2.2脱水穿心莲内酯的测定33实验结果43.1正交实验结果43.2方差分析53.3验证实验64小结与讨论6参考文献7致谢8附录19附录211目的：穿心莲屮含有脱水穿心莲内酯，它是清热解毒的主要成分，因此木实验对莲芝消炎片屮主药穿心莲的提取工艺进行研究。方法：采用正交试验方法，用HPLC测定其含量。结果：实验表明加8倍量乙醇(65%),浸渍72小吋，提取三次为最佳工艺。测定脱水穿心莲内酯的含量最高。结论：所以提取穿心莲内置用正交试验法用高效液相色谱仪进行含量测定，表明，8倍量乙醇(65%),浸渍72小时，提取三次为最佳工艺。关键词：穿心莲内酯正交试验含量测定AbstractThepurposeofanti-inflammatorytabletsbyLianzhiAndrographolidedryextract,drymountainssesameextractcomponents.HaveQingrejiedu,coolsthebloodswellingforNasalcongestionfireinsidesofcoughing,asthma,tonsillitis,Thetreatmentpharyngodyniatheeffectiveness[1].Thereforeitisofbroadprospects.Andrographiscontainsdehydroandrographolide,itisQingrejieduofthemajorcomponents,Sothisexperiment rightLianzhiTabletsmaindrugChuanxinliantheextractionprocessresearch.Methodsorthogonaltestmethod,Determinationofitscontent.Resultsshowedincreaseseighttimesthevolumeofethanol(65%),dipping72hours,threeofthebestextractionprocess.Determinationofdehydroandrographolidethehighestcontent.Keywords:orthogonalAndrographolideDeterminationTest 1引言1.1穿心莲——别名一见喜、榄核莲、印度草、斩蛇剑、苦胆草、蛇草、四方莲、四方草、雄祖草、春莲夏柳；日行千里、……。本药系爵床科须药草属一年生草本植物,我国的穿心莲最早在广东及福建南部引种栽培，经过五千年屮医药文明的人浪淘沙，穿心莲早已应用于民间，作为治痢及外科疮疡肿毒等各种疾病的要药。穿心莲性味苦寒、无毒，其主要作用是清热解毒、凉血消肿。穿心莲的各种产品临床常用于治疗各种感染性疾病，包括外伤感染、疗、痈、丹毒、上呼吸道感染、急慢性扁桃体炎、急慢性咽喉炎、急慢性支气管炎、急性菌痢、急性胃肠炎、尿路感染、子宫内膜炎、盆腔炎、屮耳炎、牙周炎等等。具有清热解毒、抗菌消炎等作用。穿心莲的副作用和毒性很小，临床应用一般是安全的，它可以改善机体免疫防御能力，发挥药物抗菌作用⑵。莲芝消炎片由穿心莲干浸膏、山芝麻干浸膏组成。具有清热解毒、凉血消肿，用于肺胃火毒内盛引起的咳嗽、气喘、扁桃体炎、喉痹咽痛的功效⑴。因此对它的研究有其广阔前景。穿心莲——在经过现代技术的研制、提取、制造等多项创新后，逐步发展，成为代表小医药文明与科技新技术的消炎良药2实验方法2.1仪器与材料2.1.1仪器德国SartoriusR2（a>D十万分之一电了分析天平250LH超声波清洗仪（上海科岛超声仪器有限公司）戴安V咖高效液相色谱仪（上海科岛超声仪器有限公司）2.1.2药材穿心莲叶（穿心莲叶'11主要成分含量最高）用粉碎机粉碎成粗粉备用，2.1.3试剂 甲醇、乙醇等试剂均为分析纯2.2实验方法的选择2.2.1因素和水平的确定屮华人民共和国卫生部药品标准第十二册屮药成方制剂莲芝消炎片屮部分参数不明确，提取工艺屮只有提取次数，而加溶媒量和提取吋间不明确，因此我们以处方屮有效成分脱水穿心莲内酯为检测指标，釆用正交实验法对提取工艺屮加溶媒量和提取时间进行考察。对实验结果进行系统分析：提取加溶媒量（A）、浸渍时间（B）、提取次数（C）,每个因素三个水平见表1表1因素水平表水平A加溶剂量（倍）B亲爱时间（小时）C提取次数（次）16481287223109632.2.2脱水穿心莲内酯的测定色谱条件与系统适用性实验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇一水（55：45）为流动相，检测波长250nm,理论塔板数按脱水穿心莲内酯计算应不低于3000o对照品溶液的制备精密称取脱水穿心莲内酣适量，加甲醇制成每1泊含20ug的溶液即得。供试品溶液的制备精密称定穿心莲干浸膏0.3g,置锥形瓶屮精密加入甲醇100ml,称定重量，超声处理(250w,25KHz)30分钟，放冷，再称定重量，加甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得测定法分别吸取上述供试殆溶液和对照品溶液个10,注入液相色谱仪，测定即得。对照品溶液液相色谱图谱见附录1。供试品溶液液相色谱图谱见附录2。 3实验结果2.1正交实验结果取穿心莲干膏所用原料(穿心莲叶100g),按正交实验方案，取药材9份(每份100g),每份按5(34)正交表所设计方案，浸渍、滤过、合并、浓缩、干燥，即得得到干浸膏36.7g,精密称定穿心莲干浸膏0.3g制备供试吊溶液。以干膏屮的脱水穿心莲内酯含量为指标，结果见表2 表2U(34)正交实验结果试验号ABcD脱水穿心莲内酯含量(ug/g)1111116.70212221&293133317.494212318.125223120.146231218.39731321&228321319.319332118.31K.52.4853.0454.4055.16K?56.6557.7454.7354.90k355.85□4.02□5.8554.92K.17.4917.6818.1318.39K：18.8819.251&2418.30K>1&6218.0718.621&31R1.391.570.490.09 每一正交表5(34)有9行4列，由数字T、“2”、“3”组成，用它来安排试验，最多允许安排4个因素即加溶媒量(A)、浸渍时问(B)、提取次数(C)及空白(D),每个因素可以考虑3个水平，共做9次试验。正交表X(34)有两个特点：（1）列屮各数字出现的次数相同。（2）在任何两列屮，各种数字对出现的次数相同。正交表的这两个特点，说明正交表具有“均衡分散性”与“整齐可表性”。因此用正交表安排试验能使任何两个因素，不同水平的搭配次数相同，且不同水平的试验次数相同，从而使试验点比较均匀并具有代表性，所以能用较少次试验及分析得出比较好的试验结果。本实验按正交表共做九次实验，用HPLC测定含量的图谱见附录2,依次为图1、图2、图3、图4、图5、图6、图7、图8、图9,结果表明图5的含量最高。2.2方差分析从三个水平看在加提取加溶媒量（A）屮各水平顺序为K2>K3>K1,说明采用8倍药材量的乙醇为佳。浸渍时间（B）各水平大小顺序为K2>K3>K,,以&水平最佳，故提取时间72小时为佳。提取次数（C）H咯水平顺序为K3>K2>K.三次结果最佳。因此最佳的提取工艺为A2B2Qo即加8倍量乙醇（65%）浸提72小吋提取三次。方差分析表明提取吋间（因素B）和提取溶媒量（因素八）对提取工艺有极显著影响，而提取次数（因索C）对提取工艺有显著影响。见表3表3方差分析表方差来源离差平方和自由度均方F值F值（）显著性A3.2650921.6325233.90.01极显著B3.9963921.9982286.30.01极显著C0.39950920.192527.600.05显著D0.0139620.00701.000 结果：Fo.o5(2,2)=19.0Fo.oi(2,2)=99.02.3验证实验按最佳工艺制备三批样品，结果测定脱水穿心莲内酯的平均含量为20.20ug/g结果符合要求。4小结与讨论脱水穿心莲内酣是穿心莲屮所含的主要成分，《小国药典》2000版一部穿心莲项下脱水穿心莲内酯的含量测定使用薄层扫描法[2],而本试验选择了HPLC法测定脱水穿心莲内酣的含量，该法具有快速、分离度好、重现性好、灵嬪度高的特点，大大缩短了对莲芝消炎片工艺提取研究的时间，并且数据准确可靠。本实验确定了莲芝消炎片屮穿心莲的提取最佳工艺为加8倍量乙醇浸提72小时提取三次。其屮提取时间（因素B）和提取溶媒量（因素A）为主要影响因素，具有极显著性。提取次数（因素C）为次要影响因素，具有显著性。这些指标可为生产提供参考依据。 参考文献[1]屮华人民共和国卫生部药品标准第十二册[S]・1998,298[2]屮华人民共和国药典2005版第一部[3]王永林，陶玲，周栄珠等.高效液相色谱法测定消炎利胆•胶囊屮脱水穿心莲内酯含量[J]•药物分析杂志,2000,20(1):43[4]孙文堇主编.天然药物成分提取分离与制备[M].北京中国医药科技岀版社，1994,11[5]王炳南，贺英菊,龙波等•脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯单钾盐含量的测定方法[J].天然气化I[C/化学与化工],1999,(3):53[6]谢春英，苏微微.莲芝消炎胶囊屮脱水穿心莲内酯的HPLC法测定.屮药材,2000,(12)[7]邓楠,王凯.高效液相色谱法测定穿王消炎胶囊屮两种成分含量•屮国医院药学杂志,2006,(08)⑻余楚钦，邓江，梁汉明，张育强.HPLC法测定莲祖消炎片屮脱水穿心莲内酯的含量.中药材,2003,(07)[9]毋福海，李光善，梁汉明，张育强.HPLC测定复方穿心莲片中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量•华西药学杂志,2004,(02)[10]陈大全，王昌利，王剑波,王四旺.正交试验优选宝枫果壳屮糅质的提取工艺研究中草药,2006,37(12):1816 在我实习期间得到了单位领导的关怀,将学校所学的专业知识运用到实际当屮,实现了学以自用的Fl标。论文的研究工作是在江苏康缘药业股份有限公司进行的，在实验过程屮得到了单位领导、老师和同事们的大力支持和帮助。尤其感谢李大伟老师,在实验期间帮助我解决很多问题，使我的论文能够顺利完成。感谢康缘药业为我提供了实验条件，感谢单位领导、老师和同事们在实验屮给予无限关怀和鼓励，向多年来所有鼓励、关心、支持和帮助我的领导、教师和同学们表示最衷心的感谢！ 附录1:SampleName:VialNumber:SampleType:ControlProgram:Quantif.Method:RecordingTime:RunTime(min):穿心莲对照品1BA1standard莲芝消炎片工艺研究莲芝消炎片工艺研究9:01AM40.00InjectionVolume:Channel:Wavelength:Bandwidth:DilutionFactor:10.0UV_VIS_1250n.a.1.0000SampleWeight:1.0000SampleAmount:1.0000No.1Total:Ret.Timemin_27.17n.a.PeakNameHeightmAU「5.4705.470AreaRel.AreaAmountTypemAU*minz6.9436.943%100.00100.00n.a.0.000BMB SampleName:VialNumber:SampleType:ControlProgram:Quantif.Method:RecordingTime:RunTime(min):莲芝消炎片工艺研究莲芝消炎片工艺研究9:42AM40.00Bandwidth:DilutionFactor:SampleWeight:SampleAmount:1.00-10.0UV_VIS_1250n.a.1.00001.00001.0000穿心莲对照品2mAU1・27.1805.00-4.00-3.00-2.00-0.0mir5.020.025.030.035.010.040.00.06001匸艺习f究衣2Imodifiedbybnovo]UV_VIS_1WVL:250nmNo.Ret.TimePeakNameHeightAreaRel.AreaAmountType1minmAUmAU*min%27.18n.a.5.5356.983100.00n.a.BMB*Total:5.5356.983100.000.000-1.00 附录2SampleName:VialNumber:SampleType:ControlProgram:Quantif.Method:RecordingTime:RunTime(min):穿心莲样33BA7unknown莲芝消炎片工艺研究莲芝消炎片工艺研究5:12PM40.00InjectionVolume:Channel:Wavelength:Bandwidth:DilutionFactor:10.0UV_VIS_1250n.a.1.0000SampleWeight:1.0000SampleAmount:1.0000No.1Total:Ret.Timemin_24.31n.a.PeakNameHeightmAU16.09016.090AreaRel.AreaAmountTypemAU*min「18.42018.420%100.00100.00n.a.0.000BMB SampleName:VialNumber:SampleType:ControlProgram:Quantif.Method:RecordingTime:RunTime(min):BA4unknown10.0UV_VIS_1250莲芝消炎片工艺研究莲芝消炎片工艺研究1:06PM40.00Bandwidth:DilutionFactor:SampleWeight:SampleAmount:n.a.1.00001.00001.000060o工艺研究#7Imodifiedbybnovo]mAUUV_VIS_1WVL:250nm50.0-40.0-30.0-1-25.08010.0-oo20.0-No.Ret.TimePeakNameHeightAreaRel.AreaAmountType1minmAUmAU*min%25.08n.a.16.46319.177100.00n.a.BMBTotal:16.46319.177100.000.000mir5.015.020.025.030.035.010.040.0-10.00.0 SampleName:VialNumber:SampleType:ControlProgram:Quantif.Method:RecordingTime:RunTime(min):BB3unknown10.0UV_VIS_1250莲芝消炎片工艺研究莲芝消炎片工艺研究10:39PM40.00Bandwidth:DilutionFactor:SampleWeight:SampleAmount:n.a.1.00001.00001.0000穿心莲样汛3mAU50.0-37525.0-12.5-0.0mir5.020.025.030.035.010.040.00.070&工艺研究#21modifiedbylenovo]UV_VIS_1WVL:250ninNo.Ret.TimePeakNameHeightAreaRel.AreaAmountType1minmAUmAU*min%24.59n.a.17.01220.358100.00n.a.BMBTotal:17.01220.358100.000.000-10.0 SampleName:VialNumber:SampleType:ControlProgram:Quantif.Method:RecordingTime:RunTime(min):BA8unknown10.0UV_VIS_1250莲芝消炎片工艺研究莲芝消炎片工艺研究7:14PM40.00Bandwidth:DilutionFactor:SampleWeight:SampleAmount:n.a.1.00001.00001.000060o工艺研究#16modifiedbylenovo]mAUUV_VIS_1WVL:250nmoo穿心莲样4250.0-40.0-30.0-20.0-1・24.77310.0-5.020.025.030.035.010.0No.Ret.TimePeakNameHeightAreaRel.AreaAmountType1minmAUmAU*min%24.77n.a.15.62418.712100.00n.a.BMBTotal:15.62418.712100.000.000mir40.0-10.00.0 SampleName:VialNumber:SampleType:ControlProgram:Quantif.Method:RecordingTime:RunTime(min):穿心莲样们BA2unknownInjectionVolume:Channel:Wavelength:10.0UV_VISJ250莲芝消炎片工艺研究建芝消炎片工艺研究10:23AM40.00Bandwidth:DilutionFactor:SampleWeight:SampleAmount:n.a.1.00001.00001.000055q_工艺研究#3inodifiedbylenovo]mAUUV_VIS_1WVL:250nm穿心莲样1140.0-30.0-20.0-1-27.00710.0-0.05.010.015.020.025.030.035.040.0No.Ret.TimePeakNameHeightAreaReLAreaAmountType1Total:minmAUmAU*min%27.01n.a.14.12517.656100.00n.a.BMB14.12517.656100.000.000mir SampleName:VialNumber:SampleType:ControlProgram:Quantif.Method:RecordingTime:RunTime(min):BC2unknown10.0UV_VIS_1250莲芝消炎片工艺研究莲芝消炎片工艺研究8:12AM40.00Bandwidth:DilutionFactor:SampleWeight:SampleAmount:n.a.1.00001.00001.000060o工艺研究#35modifiedbylenovo]mAUoo穿心莲样9150.0-40.0-30.0-20.0-1・25.88010.0-mir5.020.025.030.035.010.0UV_VIS_1WVL:250nmNo.Ret.TimePeakNameHeightAreaRel.AreaAmountType1minmAUmAU*min%25.88n.a.14.46218.915100.00n.a.BMBTotal:14.46218.915100.000.00040.0-10.00.0 SampleName:VialNumber:SampleType:ControlProgram:Quantif.Method:RecordingTime:RunTime(min):BA4unknown10.0UV_VIS_1250莲芝消炎片工艺研究莲芝消炎片工艺研究1:47PM40.00Bandwidth:DilutionFactor:SampleWeight:SampleAmount:n.a.1.00001.00001.000060o工艺研究#Xinodifiedbybnovo]穿心莲样22mAUUV_VIS_1WVL:250nm50.0-40.0-30.0-1•24.88010.0-oo20.0-No.Ret.TimePeakNameHeightAreaRel.AreaAmountType1minmAUmAU*min%24.88n.a.16.58319.179100.00n.a.BMBTotal:16.58319.179100.000.000mir5.015.020.025.030.035.010.040.0-10.00.0 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