间充质干细胞临床应用的安全性问题.doc

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1、间充质干细胞临床应用的安全性问题［摘要］间充质干细胞是干细胞家族的重要成员，起源于中胚层和外胚层，因其具有易分离、趋化性、免疫调节作用、多向分化潜能等生物学特性而H益受到人们的关注，并成为细胞疗法屮治疗各种难治性疾病的热门种子细胞，然而细胞疗法所涉及的潜在风险还不确定。本文就间充质干细胞应用所涉及的安全性问题作综述，并强调建立规范化的应用标准更有利于细胞产品在临床上的应用和推广，给广大患者带来真止的福音。［关键词］间充质干细胞；细胞疗法；安全性［中图分类号］R457.7［文献标识码］A［文章编号］1674-4721(2014)11(b)-0190-03细胞疗法

2、近年来已成为治疗多种疾病的新策略，其目的是替代修复或加强受损组织和器官的生物学功能。随着干细胞生物学与再生医学研究的深入，人们对于其生物学特性及潜在的临床应用认识逐渐加深，使Z成为细胞疗法中应用最多的靶细胞［1-3］o随着对间充质干细胞(mesenchymalstemcells,MSCs)认识的逐步深入，其自身的优越性逐渐显露出来，将成为细胞替代治疗的理想种子细胞。对于MSCs研究的某些成果已开始应用于临床，有一些虽然暂时未能在临床上开展，但也为有些疾病的临床治疗提供了新的治疗角度和思路。对于MSCs治疗作用的评估最开始是在再生医学的应用上，MSCs已经显示出

3、具有直接调节先天性与适应性免疫系统的作用［4］、促进上皮细胞增殖［5］、促进缺血性组织的血管再生等等［6］,MSCs的这些特性发现开启了MSCs移植治疗免疫性、组织损伤性等疾病的新纪元。近年来，对一些难治性疾病采用MSCs移植治疗已经得到美国食品和药物管理局(US-FDA)的批准，包括心肌梗死、脑卒中、半月板损伤、移植物抗宿主病及口身免疫紊乱性疾病等[7]。尽管在过去的十几年中，临床试验很少发现MSCs移植会产生不利的影响，但在动物实验则发现可能存在较短时间内未发现潜在性的危害，本文将MSCs移植涉及的安全性问题作总结。MSCs移植方法的过程包括细胞的采集、分

4、离、培养、纯化以及细胞移植到患者体内。临床应用干细胞治疗疾病最重要的前提之一就是必须保证细胞产品的安全性、有效性和质量可控性，其中质量可控性是安全性和有效性的基础和保证。那么，如何保证用于临床的干细胞是安全、有效，并保证质量可控呢？对于这些细胞的分离、培养、鉴定和移植有可靠的履行规则吗？目前，在欧洲国家已经开始提出使用临床级的MSCs产品，并且开始制订包括无菌、细胞活力和染色体表型等的各种质控标准。细胞治疗的过程非常复杂，有许多基本的生物学问题需要弄清楚。事实上，MSC,移植的应用不仅面临其他细胞疗法共同的安全性问题，也面临其所独有的问题。1细胞的分离、培养和

5、纯化虽然来源于骨髓比来源于其他组织的MSCs的数量相对更多，但MSCs的数量仅占骨髓总量的0.001%~0.01%[8],很难满足临床细胞治疗的需要，因此需要培育人量的MSCs来满足其应用，但在MSCs的分离、培养、细胞增殖传代的过程中有许多问题需要考虑。干细胞组织来源多样，供者的既往病史、家族史、性别、年龄、血型、组织相容性抗原等遗传背景都需要考虑。在进行自体移植收集细胞的时候，也需耍对患者的整体状况作评估。提取细胞的手术可能会损伤患有感染、肾脏疾病、心包积液等禁忌证患者的健康。对于细胞产品本身来说，确保其无菌状态是细胞疗法的一个首要问题，因为细胞产品不能像

6、其他药品那样有一个终端灭菌消毒的过程，因此全程操作必须在无菌条件下进行［9］。在收集细胞之前，所有的肠道外用药和医疗器械都需高温消毒，一次性物品也耍进行消毒处理，并行有氧和厌氧菌及真菌微生物检测，以保证细胞无菌且不会给患者带来伤害。另外，培养条件对于维持细胞的特性也非常重要。细胞的体外分离、培养、扩增和细胞制品制备过程的漫长且需要加入血清、抗生素、生长因子、抗体、胶原酶、蛋白酶等物质，外来物质的污染也不可避免，在此过程中，以加入的血清为例，目前细胞培养的培养基需要加入10%〜20%的胎牛血清(fetalbovineserum,FBS或fetalcalfseru

7、m,FCS),虽然FBS或FCS似乎是获得高质量MSCs必不可少的，但其能带来潜在的危险，甚至在移植入患者体内后引起免疫反应［10-11］,包括传播具有免疫原性的异种蛋白和致病原等［12］,而使MSCs移植的疗效大大降低［13］。因此在细胞培养过程中，寻找FBS/FCS的替代物或采用无血清培养，取消非人产品的使用来降低潜在的风险是有必要的［14］oDoucet等［15］已经发现在体外培养MSCs时，采用血小板血浆培养细胞维持MSCs分化能力比FCS的效果更好。其他外来因素包括细菌、支原体、病毒等也会影响细胞产品的应用。对于病毒來说，最主要的来源是供体的骨髓，因

8、此对于供体的血清学检测分析是否存在人类