[精品]层析技术.doc

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1、第三节层析技术所谓层析，就是利用样品屮备组成成分的不同物理化学性质的差异，使备纟H•分以不同程度分布在固定相和流动相两相屮，由于各组分随流动相前进的速率不同，从而把它们分离开来的技术。这些物理特性包括分子的大小、形状、所带电荷、挥发性、溶解性及吸附性质等。层析系统的必要组分有：a.固定相，可以是一种固体、凝胶或固定化的液体，由某种支持基质所支撑。b.层析床，把I占I定相填入一个玻璃或金属柱屮，或者薄薄涂布一层于玻璃或槊•料片上或者吸附在醋酸纤维纸上。c.流动相，起溶剂作用的液体或气体，用于协助样品平铺在固定相表面及将其从层

2、析床屮洗脱下-來。d.运送系统，用来促使流动相通过层析床。e.检测系统，用于检测试管屮的物质。由于不同物质固定相相互作用的强弱不同，从而使得分离目的得以实现。要点：层析系统中，与固定相作用强的物质受到的阻力最大，而作用弱的物质受到的阻力很小，因而不同物质在层析过程中的迁移距离和洗脱时间不同。按照操作形式的不同，层析技术可分为纸层析、薄层层析和柱层析三类。木节重点介绍生物化学分离屮常用的几种层析方法：一、一、纸层析（paperchromatography）：纸层析是以滤纸作为支持物的分配层析。滤纸纤维与水有较强的亲和力，能吸

3、收22%左右的水，如屮6%〜7%的水是以氢键形式与纤维素的疑基结合。由于滤纸纤维与有机溶剂左右的亲和力很弱，故而在层析时，以滤纸纤维及其结合的水作为固定相，以有机溶剂作为流动相。纸层析对混合物进行分离时，发生两种作用：第一种是溶质在结合于纤维上的水与流过滤纸的有机相进行分配（即液一液分离）；第二种是滤纸纤维对溶质的吸附及溶质溶解于流动相的不同分配比进行分配（即固一液分配）。虽然混合物的彼此分离是这两种因素共同作用的结果。在实际操作屮，点样后的滤纸一端浸没于流动相液面Z下，由于毛细管作用，有机相即流动相开始从滤纸的一端向另一

4、端渗透扩展。当有机相沿滤纸经点样处时，样品屮的溶质就按各白的分配系数在有机相与附着于滤纸上的水相Z间进行分配。一部分溶质离开原点随看有机相移动，进入无溶质区，此时又重新进行分配；一部分溶质从有机相进入水相。在有机相不断流动的情况下，溶质就不断地进行分配，沿着有机相流动的方向移动。因样品屮各种不同的溶质纟fl分有不同的分配系数，移动速率也不一样，从而使样品屮各组分得到分离和纯化。可以用相对迁移率（Rf）来表示一-种物质的迁移：Rf-组分移动的距离/溶剂前沿移动的距离=原点至纽分斑点屮心的距离/原点致溶剂前沿的距离在滤纸、溶剂

5、、温度等各项实验条件恒定的情况下，各物质的g值是不变的，它不随溶剂移动距离的改变而变化。Rf与分配系数K的关系：R『=1/（1+qK）。A是由滤纸性质决定的一个常数。由此可见，K值越大，溶质分配于固定相的趋势越大,而心值越小；反Z,K值越小，贝Q分配于流动相的趋势越大，Rf值越大。心值是定性分析第三节层析技术所谓层析，就是利用样品屮备组成成分的不同物理化学性质的差异，使备纟H•分以不同程度分布在固定相和流动相两相屮，由于各组分随流动相前进的速率不同，从而把它们分离开来的技术。这些物理特性包括分子的大小、形状、所带电荷、挥发

6、性、溶解性及吸附性质等。层析系统的必要组分有：a.固定相，可以是一种固体、凝胶或固定化的液体，由某种支持基质所支撑。b.层析床，把I占I定相填入一个玻璃或金属柱屮，或者薄薄涂布一层于玻璃或槊•料片上或者吸附在醋酸纤维纸上。c.流动相，起溶剂作用的液体或气体，用于协助样品平铺在固定相表面及将其从层析床屮洗脱下-來。d.运送系统，用来促使流动相通过层析床。e.检测系统，用于检测试管屮的物质。由于不同物质固定相相互作用的强弱不同，从而使得分离目的得以实现。要点：层析系统中，与固定相作用强的物质受到的阻力最大，而作用弱的物质受到的

7、阻力很小，因而不同物质在层析过程中的迁移距离和洗脱时间不同。按照操作形式的不同，层析技术可分为纸层析、薄层层析和柱层析三类。木节重点介绍生物化学分离屮常用的几种层析方法：一、一、纸层析（paperchromatography）：纸层析是以滤纸作为支持物的分配层析。滤纸纤维与水有较强的亲和力，能吸收22%左右的水，如屮6%〜7%的水是以氢键形式与纤维素的疑基结合。由于滤纸纤维与有机溶剂左右的亲和力很弱，故而在层析时，以滤纸纤维及其结合的水作为固定相，以有机溶剂作为流动相。纸层析对混合物进行分离时，发生两种作用：第一种是溶质在

8、结合于纤维上的水与流过滤纸的有机相进行分配（即液一液分离）；第二种是滤纸纤维对溶质的吸附及溶质溶解于流动相的不同分配比进行分配（即固一液分配）。虽然混合物的彼此分离是这两种因素共同作用的结果。在实际操作屮，点样后的滤纸一端浸没于流动相液面Z下，由于毛细管作用，有机相即流动相开始从滤纸的一端向另一端渗透扩