手足口病病原学和其诊断探究进展

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1、手足口病病原学和其诊断探究进展　　摘要：手足口病是一种儿童常见传染病，该病播散快、流行性强，可在短时间内造成大规模流行，严重威胁儿童的身体健康。2008年5月2日，我国卫生部正式将手足口病列入传染病防治法规定的丙类传染病进行管理。引起手足口病的肠道病毒有很多种，并且不同病毒感染所致手足口病的疾病过程不同，早期发现手足口病尤其是重症病例，并给予积极综合处理是治疗成功的关键，因此，快速、特异的病原学诊断显得尤为重要，在此对手足口病病原组成及病原学诊断方法等研究进展进行简要概述。关键词：手足口病；肠道病毒；病原学

2、诊断手足口病（Hand，footandmouthdisease，HFMD）是一种由多种肠道病毒引起的急性传染病，多发生于儿童，尤其是　　病毒在标本中的滴度以及其在分离体系中生长适应性，分离操作的外环境等可对分离结果产生影响，同时，病毒培养耗时较长，无法满足病毒流行期间同时处理大量标本的需要，由此可见，病毒分离培养法敏感性欠佳，但对于一些含有PCR抑制因素的样品来说，病毒分离培养法也许是唯一的PCR法不能取代的检测方法。2.2血清学检测7血清学检测是利用抗体和其对应抗原之间发生专一反应的一种检测方法，包括中和

3、试验（neutralizationtest）、酶联免疫吸附试验（enzyme-linkedimmunosorbnentassay，ELISA）、免疫荧光试验（immunofluorescencetest）和补体结合试验（complementfixationtest，CF）等。肠道病毒特异性鉴定主要靠中和试验，即微量板法测定抗体滴度。如果检测急性期患者血清中特异性IgM抗体阳性，或急性期与恢复期血清（病后一个月左右）IgG抗体有>4倍升高，可为实验室诊断病例[26]。但病毒颗粒的完整性、抗血清滴度的强弱、宿主

4、细胞的敏感性等各因素的变化都会影响其结果的准确性，而且整个实验需早期感染血清和恢复期血清判断实验结果，所需时间较长，故不适用于早期快速诊断，同时对检测人员技术要求较高，不适用于临床检测，多用于流行病学研究。ELISA是利用酶标记抗体后仍能与相应的抗原形成免疫复合物的原理，经底物显色后可观察结果，包括间接法、双抗体夹心法、双抗原夹心法、捕获法和生物素亲和素法、膜酶免疫试验和微孔腊免疫试验、竞争性抑制等多种方法。利用ELISA捕捉法或间接法检测早期患者血清中的IgM和IgG抗体，是常用的手段。ELISA法相对而

5、言简便、快速，不需要专业的技术人员，且对实验室的要求也不高，但是ELISA法的敏感性低于PCR法。2.3分子生物学方法2.3.1病原学诊断72.3.1.1核酸杂交技术核酸杂交分为原位杂交（insituhybridization）、斑点杂交（dotblot）、转印杂交（Southernblot、Northernblot）等。该技术是将同位素或生物素标记的探针与患者标本中提取的病毒RNA进行杂交，进行定性、定量分析，该技术的敏感性较高。2.3.1.2PCR方法PCR技术已成为诊断肠道病毒感染最常用的一种方法，是

6、目前灵敏度最高的RNA检测技术。PCR方法可分为RT-PCR、实时荧光定量PCR（real-timefluorescentquantitativePCR，FQ-PCR）、TaqMan荧光定量RT-PCR、半套式RT-PCR、巢式PCR、半巢式PCR法等。RT-PCR法是以RNA为模板逆转录成互补DNA（cDNA），再以该链为模板进行PCR反应，可检测出单个细胞中　　[3]ChristinaTryfonos，JanRichter，DanaKoptides，etal.MolecularTypingandEpid

7、emiologyofEnterovirusesinCyprus，2003-2007[J].JMedMicrobiol，2011，60（Pt10）：1433-40.[4]ZhengZM，HePJ，CaueffieldD，etal.Enterovirus71isolatedfromChinaisserologicallysimilartotheprototypeEV71BrCrstrainbutdiffersinthe5’-noncodingregion[J].JMedVirol，1995，47（2）：161-

8、167.[5]Ang，L.W.，Koh，B.K.W.，Chan，K.P.，et7al.Epidemiologyandcontrolofhand，footandmouthdiseaseinSingapore，2001-2007[J].AnnAcadMedSingapore，2009，38，106-112.[6]杨晓红，等.2010年昆明地区手足口病的流行特征[J].中国当代儿科杂志，2012，14（3）：192-1