生物化学实验复习题 2.doc

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1、生物化学实验复习题：1.试述旋光法测定淀粉含量的实验原理。在加热及稀盐酸的作用下，淀粉水解并转入盐酸溶液中。在一定的水解条件下，不同谷物淀粉的比旋光度是不同的。其在171～195之间，因此可用旋光法测定粗淀粉的含量。2.淀粉含量测定的方法有几种？比较各方法特点。淀粉是由多个葡萄糖缩合而成的多糖，测定淀粉的方法主要有酸水解法、酶水解法和旋光法等。1、酸水解法：面粉经乙醚除去脂肪，乙醇除去可溶性糖类后，用酸水解淀粉为葡萄糖，按还原糖测定方法测定还原糖含量，再折算为淀粉含量。2、酶水解法：面粉经除去脂肪及可溶性糖类后，其中淀粉用淀粉

2、酶水解成双糖，再用盐酸将双糖水解成单糖，最后按还原糖测定，并折算成淀粉。3、旋光法：在加热及稀盐酸的作用下，淀粉水解并转入盐酸溶液中。在一定的水解条件下，不同面粉淀粉的比旋光度是不同的。其淀粉的比旋光度在171~195之间，因此可用旋光法测定淀粉的含量。3.简述旋光法测定淀粉的关键步骤。1.样品的处理在电子天平上称取小麦粉2.5000g置于三角瓶中→加入50ml1%HCl混成浆状（不能有结块）→沸水浴中准确加热15min→先加1ml30%ZnSO4混匀→再加1ml15%亚铁氰化钾混匀→移至100ml容量瓶中加水定容混匀后过滤→

3、弃去最初15ml收集其余滤液。2.旋光度测定取滤液20ml置于旋光管中，先用1%HCl调节旋光仪“0”点，然后将样品溶液放入旋光仪中测α4.写出计算粗淀粉含量的公式并说明各符号的含义。1.试述凯氏定氮法测定蛋白质含量的实验原理。含氮的有机物与浓硫酸共热时，其中的碳、氢二元素被氧化成二氧化碳和水，而氮则转变成氨，并进一步与硫酸作用生成硫酸铵。浓碱可使消化液中的硫酸铵分解，游离出氨，借水蒸汽将产生的氨蒸馏到一定浓度的过量硼酸溶液中，硼酸吸收氨后使溶液中氢离子浓度降低，然后用标准无机酸滴定，直到恢复溶液中原来氢离子浓度为止，最后根据

4、所用标准酸的摩尔数（相当于待测物中氨的摩尔数）计算出待测物中的总氮量。2.蛋白质含量测定的方法有几种？比较各方法特点。定氮法,双缩尿法（Biuret法）、Folin－酚试剂法（Lowry法）和紫外吸收法.考马斯亮蓝法（Bradford法）.凯氏定氮灵敏度低,适用于0.1.0mg氮,误差为±2％费时 10小时将蛋白氮转化为氨,用酸吸收后滴定非蛋白氮（可用三氯乙酸沉淀蛋白质而分离）用于标准蛋白质含量的准确测定；干扰少；费时太长双缩脲法（Biuret法）灵敏度低20mg中速20~30分钟多肽键＋碱性Cu2＋®紫色络合物硫酸铵；Tri

5、s缓冲液；某些氨基酸用于快速测定,但不太灵敏；不同蛋白质显色相似紫外吸收法较为灵敏50～100mg快速10分钟蛋白质中的酪氨酸和色氨酸残基在280nm处的光吸收各种嘌吟和嘧啶；Folin－酚试剂法（Lowry法）灵敏度高5mg慢速40～60分钟双缩脲反应；磷钼酸－磷钨酸试剂被Tyr和Phe还原硫酸铵；Tris缓冲液；甘氨酸；各种硫醇耗费时间长；操作要严格计时；颜色深浅随不同蛋白质变化 考马斯亮蓝法(Bradford法)灵敏度最高5mg快速5～15分钟考马斯亮蓝染料与蛋白质结合时,其lmax由465nm变为595nm强碱性缓冲液

6、；SDS最好的方法；干扰物质少；颜色稳定；颜色深浅随不同蛋白质变化1.简述凯式定氮法测定蛋白质的关键步骤。1、消化：在电子天平上称取小麦粉0.2000g--0.4000g置于凯氏试管底部→加混合混合催化剂0.5g和3ml浓硫酸置于消化炉中高温加热至淡绿色透明（2h左右）取出放入通风橱至不冒白烟，向其中加20ml水，并移至100ml容量瓶定容→即得样品消化液。同时每4组8人做1空白实验：0.5g混合催化剂+3ml浓硫酸置于凯氏试管中放入消化炉加热至淡绿色（1h左右）→冷却后加水移入100ml容量瓶中定容得空白消化液。2.蒸馏与吸

7、收：吸取10ml2%的硼酸于三角瓶中→加4d甲基红-溴甲酚绿混合指示剂（若变绿色则用0.01mol/LHCl调至紫红色）。将其置于冷凝管下端并使管尖插入液面以下，再吸取5ml消化液从漏斗上方加入蒸馏室用水洗两次，并加入10ml40%NaOH后水封（注意：勿使漏斗玻杆取下以防漏气），然后打开通气阀进行加热蒸馏，直至吸收液由紫红色变成绿色，计时蒸馏3min→先移去吸收液再停止加热以防倒吸。3.滴定：用0.01mol/LHCl滴定吸收液由绿色退去变红色为止，记下耗去标准盐酸的体积(V1.V0)。2.写出计算蛋白质含量的公式并说明各符

8、号的含义。1.试述淀粉酶活力测定的实验原理。淀粉酶主要包括α-淀粉酶和β-淀粉酶两种。α-淀粉酶可作用于淀粉中的α-1,4-糖苷键，生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖，β-淀粉酶可从淀粉的非还原性末端进行水解，生成麦芽糖。淀粉酶催化产生的这些还原糖能使3,5-二硝基水