可食性动物组织中卡巴氧残留标示物elisa检测方法建立

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1、可食性动物组织中卡巴氧残留标示物ELISA检测方法建立　　摘要：将卡巴氧残留标示物喹喔啉-2-羧酸（QCA）与γ-氨基丁酸（ABA）衍生成喹喔啉-2-甲酰胺丁酸（QCA-ABA），再与牛血清白蛋白（BSA）偶联作为免疫原（QCA-ABA-BSA），将QCA与卵清白蛋白（OVA）偶联作为包被原（QCA-OVA），建立了猪可食性组织中QCA的间接竞争ELISA检测方法。结果表明，最优的QCA-OVA包被抗原浓度为4μg/mL，抗体稀释倍数为1∶3.2×104，最适检测范围为0.2～51.2ng/mL，最低检测限为0.6μg/kg，对猪肌肉和猪肝脏的添加回收率为4

2、7.4%～87.7%。关键词：卡巴氧；喹喔啉-2-羧酸；ELISA；残留检测中图分类号：TS251.7文献标识码：A文章编号：0439-8114（2014）01-0193-04DevelopmentofanELISAMethodforScreeningofMarkerResidueofCarbadoxinAnimalEdibleTissuesZHANGZe-ying1，YUANZong-hui2（1.DepartmentofFoodEngineering，WuhanBioengineeringInstitute，Wuhan430015，China；2.Min

3、istryofAgricultureKeyLaboratoryofFoodSafetyEvaluation，Wuhan430070，China）11Abstract：Derivatizedquinoxaline-2-carboxylicacidsamarkerresidueofcarbadoxwithγ-aminobutyricacid（ABA），wasconjugatedtoBSAtoprepareimmunogen（QCA-ABA-BSA），andQCAwasconjugatedtoOVAtopreparecoatingantigen（QCA-OVA）.

4、IndirectcompetitiveELISAforQCAderivatizative（QCA-ABA）wasestablishedtodetermineQCAinpigedibletissues.Theresultsoftheexperimentdemonstratedthattheoptimalconcentrationofthecoatingantigen，dilutionmultipleofpolyclonalantibodyagainstQCA-ABAwere4μg/mL，1∶3.2×104，respectively.Thestandardcur

5、veofindirectcompetitiveELISAisalsoestablished.Thecurvehasafavorablelinearityrelationwithintheconcentrationrangeof0.2～51.2ng/mL，indicaingthatthelowestdetectionlimitis0.6μg/kg，withtherecoveryrateof47.4%～87.7%inswinemuscleandlivertissues.Keywords：carbadox；QCA；ELISA；residuedeterminatio

6、n收稿日期：2013-09-2911基金项目：上海市科技兴农计划项目（沪农科攻字2003B99）作者简介：张泽英（1980-），女，四川泸州人，讲师，硕士，主要从事食品分析检测工作，（电话）027-89665836（电子信箱）27185096@qq.com；通讯作者，袁宗辉，教授，博士生导师，（电子信箱）zonghui55@163.com。卡巴氧于1999年被欧盟列为禁用药，随后许多国家也出台了相应的法规限制该药的使用。然而，由卡巴氧残留引发的食品安全问题仍时有发生。目前，大量出口到欧盟等国的可食性动物组织主要是利用色谱方法，如LC-UV[1，2]、GC-M

7、S[3]和LC-MS-MS[4-7]监测卡巴氧及其代谢物的残留，这些技术耗时、耗力，并且需要大量资金，不适合高通量筛选，因此很有必要开发一种快速、低廉的高通量筛选方法来满足卡巴氧残留监测的需求。ELISA以免疫结合反应为原理，在简化分析过程、提高速度和降低成本方面具有特殊意义，能弥补上述不足，因而发展迅速。该研究以卡巴氧残留标示物喹喔啉-2-羧酸（Quinoxaline-2-carboxylicacid，QCA）为半抗原制备多抗，旨在建立一种可用于可食性动物组织中卡巴氧残留的ELISA检测方法。1材料与方法1.1试剂与仪器11喹喔啉-2-羧酸（QCA，≥99

8、%，Sigma公司）；牛血清白蛋白（BSA，≥98%