液相色谱-三级质谱法分析尿液中β2-受体激动剂及β-受体阻断剂多组分残留.pdf

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1、第39卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告第8期2011年8月ChineseJournalofAnalyticalChemistryl153～l158液相色谱一三级质谱法分析尿液中J5iz一受体激动剂及j}-受体阻断剂多组分残留范赛邹建宏苗虹吴永宁赵云峰(中国农业大学动物医学院，北京100193)(中国疾病预防控制中心营养与食品安全所化学污染与健康安全重点实验室，北京100021)(中国人民解放军第二炮兵总医院心血管内科，北京100088)摘要建立了SPE柱净化结合液相色谱一三级质谱测定

2、尿液中12种一受体激动剂和4种I争受体阻断剂的方法。尿液样品经冷冻离心，加入葡萄糖苷酸酶酶解后，以高氯酸沉淀蛋白，经HLB和MCX固相萃取柱净化。在WatersAtlantis@T3色谱柱上以甲醇和含0．1％甲酸流动相进行梯度洗脱分离，采用ESI源正离子模式进行三级子离子监测，外标法定量。16种化合物的线性范围在0．005～0．160mg&g之间，相关系数(r)大于0．995；各化合物检出限均低于O．2gg。以O．005，0．01和0．02mg／L为添加水平的空白尿液的加标回收率在41．2％～8

3、8．2％之间；相对标准偏差在2．7％～19．2％之间。本方法准确可靠，灵敏度高，可用于尿液中一受体激动剂和受体阻断剂残留的定性与定量检测。关键词液相色谱一质谱法；一受体激动剂；p-受体阻断剂；尿液；固相萃取引言作为临床上广泛应用于治疗支气管哮喘等症的一受体激动剂，具有脂肪再分配作用和促进生长作用，而被滥用于食品动物饲养中，而作为治疗高血压等心血管疾病的受体阻断剂则是被作为镇静剂滥用于动物运输过程。这两种药物又是国际奥林匹克委员会(Internationalolympiccommittee，IOC

4、)禁止使用的兴奋剂[1】。过量滥用该类药物或食用高残留的动物组织均会影响人体健康，出现肌肉振颤、心动过速、心悸、恶心、眩晕和紧张等中毒症状口~4J。由于对尿液的监测是一种简便快速确定一受体激动剂和受体阻断剂滥用情况的手段，因此研究和开发尿液中一受体激动剂和受体阻断剂类药物的分析技术，对于临床药物代谢研究、体育赛事兴奋剂检测和食品安全检测都具有重要意义。目前，一受体激动剂测定的样本主要以尿液[5~13]、血液等体液样本和动物肌肉、肝，坻]、肾【l等食用组织样本为主，受体阻断剂测定的样本主要是环境样

5、品[2伽和尿液[5~¨。测定方法主要有高效液相色谱法(HPLC)【5】、气相色谱一质谱联用法(GC—MS)口]、液相色谱一质谱联用法(LC—MS)。’∞以及EIA、ELISA等”免疫分析法。免疫技术或酶联免疫技术虽然灵敏度高，简便快速，但假阳性率不可避免，一般用于样品筛选；GC-MS法通常需要复杂的衍生步骤使待测物转化为气相色谱可分析的化合物，LC-MS法则需要对样品进行较彻底的净化以改善待测物在质谱上的基质抑制效应。关于一受体激动剂及受体阻断剂文献报道较多，而二者同时检测的文献相对较少，本方法

6、则采用HLB和MCX固相萃取柱组合净化尿液样品，以液相色谱三级质谱同时检测了一受体激动剂及受体阻断剂。三级质谱相对于二级质谱而言，具有更强的定性能力，并进一步提高了方法的特异性，降低基质干扰，使方法具有更高的灵敏度。2实验部分2．1仪器与试剂Varian501YMS高效液相色谱一离子阱质谱仪(美国Varian公司)；配212型液相色谱仪；Sigma3K2010-11—15收稿；2011—01—27接受本文系国家自然科学基金重点基金(No．20837003)、卫生部卫生科技专项(No．200902

7、009)和“十一五”科技支撑计划项目(No．2006BAK02A27)资助E—mail：miaohong0827@163．~om54第39卷15型离心机(美同Sigma公司)；OasisHLB同相萃取小柱(6mL，200mg。Waters公I—j)；OasisMCX闻卡H萃取小牲(6mL，150mg，Waters公一j)；NDO一700恒温燥箱(EYELA东京理化公司)。甲醉(色谱纯，J．T．Baker公司)；甲酸(纯度为99％，Ameisensaeure公司)；HCIO(优级纯，北京化)；Na

8、OH(优级纯，北京化学试剂公司)；p-葡萄糖苷酸酶／芳基硫酸酯酶(116400unit／mL。德罔SigmaAldrich公司)；浓氨水(优级纯。灭津市尔方化TJ一)；超纯水，电阻率为18．2Q·cm(经Millipore公一j超纯水器制备)。受体激动刹标准：浪布特、塞布特罗(纯度99％，WITEGALaboratorienBerlin—AdlershofGmbH。德固)；塞曼特(纯度99．5％，Boehringerlngekheim)；克伦普罗、克伦磅特(纯度99％．EUReferenceLa